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申请/专利权人：广东医科大学
摘要：本发明公开了一种敲除BLU基因的永生化宫颈上皮细胞系及其建立方法和应用。包括如下步骤：S1：BLU基因下游位点特异性BLU‑sgRNA序列设计；S2：构建LenticRISPRv2puroBLU‑sgRNA质粒载体；S3：LenticRISPRv2puroBLU‑sgRNA质粒转染细胞与慢病毒的收获；S4：慢病毒感染细胞株，筛选出具有抗性导入敲除基因的细胞株；S5：对筛选出的细胞株用稀释克隆法铺板获得单克隆细胞株；S6：对获得的单克隆细胞株收集裂解细胞，免疫印迹鉴定BLU基因的敲除。本发明建立细胞系的方法简单、易行、高效，能精准定位基因位点。构建的BLU敲除细胞系，为抑癌基因缺失在肿瘤相关疾病致病机理的研究、抑癌基因的功能与评价提供了有利工具。
主权项：1.一种建立敲除BLU基因的永生化宫颈上皮细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：抑癌基因BLU下游位点特异性BLU-sgRNA序列设计及评估；S2：构建LenticRISPRv2puroBLU-sgRNA质粒载体；S3：LenticRISPRv2puroBLU-sgRNA质粒转染细胞与慢病毒的收获；S4：用S3的慢病毒感染细胞株，抗性药物筛选出具有抗性导入敲除基因的细胞株；S5：对S4筛选出的细胞株用稀释克隆法铺板获得单克隆细胞株；S6：对S5获得的单克隆细胞株收集裂解细胞，免疫印迹鉴定BLU基因的敲除。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东医科大学 敲除BLU基因的永生化宫颈上皮细胞系及其建立方法和应用
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