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摘要：所述的发明提供了含有结合人酪氨酸激酶受体FLT3FLK2受体蛋白和在T‑细胞上表达的CD3受体蛋白的双特异性抗体的组合物，和含有所述双特异性抗体的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于消除患者中的造血干细胞造血祖细胞HSCHP。

主权项：1.结合人FLT3和人CD3两者的重组单链双特异性抗体在制备药物中的用途，所述药物用于通过选择性消除造血干细胞和造血祖细胞为造血细胞移植准备或调理患者，其中所述双特异性抗体的结合FLT3的抗原结合部分的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:1，并且所述双特异性抗体的结合FLT3的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:2，其中治疗量的所述药物结合造血干细胞造血祖细胞HSCHP表面上的FLT3，并且结合T细胞表面上的CD3，从而募集针对HSCHP的T-细胞，并且有效地使外周血中表达CD45、CD3、FLT3、CD19、CD33中的一种或多种的细胞群体的水平降低。

全文数据：使用双特异性抗体消除患者中的造血干细胞造血祖细胞HSCHP的方法对相关申请的交叉引用本申请要求标题为“使用双特异性抗体消除患者中的造血干细胞造血祖细胞HSCHP的方法（MethodofEliminatingHematopoieticStemCellsHematopoieticProgenitorsHSCHPinaPatientUsingBi-SpecificAntibodies）”的美国临时申请号62317,9062016年4月4日提交的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。技术领域所述的发明一般地涉及造血细胞移植、治疗性抗体制备和它们的用途。发明背景造血干细胞造血干细胞是所有血液细胞的共同祖先。作为多能细胞，它们可以分化成多个细胞谱系，但是不可分化成源自三个胚层的所有谱系。造血干细胞分化产生淋巴样和髓样细胞谱系，即血细胞生成的两个主要分支Kondo,M.“Lymphoidandmyeloidlineagecommitmentinmultipotenthematopoieticprogenitors,”Immunol.Rev.2010年11月;2381:37-46。淋巴样谱系细胞包括T、B和天然杀伤NK细胞。髓样谱系包括巨核细胞和红细胞MegE以及粒细胞的不同子集嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和肥大细胞GM，它们属于髓样谱系上文出处，引用KondoM,等人.Biologyofhematopoieticstemcellsandprogenitors:implicationsforclinicalapplication.Ann.RevImmunol.2003;21:759-806.,WeissmanIL.Translatingstemandprogenitorcellbiologytotheclinic:barriersandopportunities.ScienceNewYork,NY.2000年2月25日;2875457:1442-6；也参见Iwaskaki,H.和Akashi,K.“Myeloidlineagecommitmentfromthehematopoieticstemcell,”Immunity2662007年6月,726-40。HSC具有自我更新潜力和分化成血液谱系的能力；即，当干细胞分裂时，平均而言50%的子代细胞具有确定的细胞谱系，而剩余的50%不会分化。该过程通过不对称细胞分裂维持相同的干细胞数目，使得每个分裂的干细胞源自一个新的干细胞和一个分化的细胞。相反，在对称分裂中，干细胞100%源自相同干细胞Gordon,M.Stemcellsandhaemopoiesis.见：Hoffbrand,V.,Catovsky,D.,Tuddenham,例如，第5版BlackwellPublishing,2005:DifferentialnicheandWntrequirementsduringacutemyeloidleukemia,第1-12页.NewYork.。淋巴样和髓样谱系在祖先水平是可分离的。共同淋巴样祖细胞CLP可以在生理条件下分化成所有类型的不具有显著髓样潜力的淋巴细胞KondoM,SchererDC,MiyamotoT,KingAG,AkashiK,SugamuraK,等人.Cell-fateconversionoflymphoid-committedprogenitorsbyinstructiveactionsofcytokines.Nature.2000年9月21日;4076802:383-6，尽管一些骨髓相关基因可能在CLP中检测到，这取决于实验条件DeloguA,SchebestaA,SunQ,AschenbrennerK,PerlotT,BusslingerM.GenerepressionbyPax5inBcellsisessentialforbloodcellhomeostasisandisreversedinplasmacells.Immunity.2006年3月;243:269-81。类似地，共同髓样祖细胞CMP可以产生所有类别的不具有或具有充分低水平的B-细胞潜力的髓样细胞AkashiK,TraverD,MiyamotoT,WeissmanIL.Aclonogeniccommonmyeloidprogenitorthatgivesrisetoallmyeloidlineages.Nature.2000年3月9日;4046774:193-7。另一种细胞类型，树突细胞DC，则没有被清楚地归类进淋巴样或髓样谱系中，因为DC可以源自CLP或CMPManzMG,TraverD,MiyamotoT,WeissmanIL,AkashiK.Dendriticcellpotentialsofearlylymphoidandmyeloidprogenitors.Blood.2001年6月1日;9711:3333-41,TraverD,AkashiK,ManzM,MeradM,MiyamotoT,EnglemanEG,等人.DevelopmentofCD8alpha-positivedendriticcellsfromacommonmyeloidprogenitor.ScienceNewYork,NY.2000年12月15日;2905499:2152-4。CMP可以增殖和分化成巨核细胞-红细胞MegE祖先和粒细胞-单核细胞GM祖先，它们进一步产生巨核细胞、红细胞、粒细胞、单核细胞和其它细胞IwasakiH,AkashiK.Myeloidlineagecommitmentfromthehematopoieticstemcell.Immunity.2007;26:726-740。转录因子的表达水平的差异可能决定分化细胞的谱系亲密关系（affiliation）。转录因子PU.1和GATA-1已经分别涉入髓样和红细胞巨核细胞谱系分化Gordon,M.Stemcellsandhaemopoiesis.见：Hoffbrand,V.,Catovsky,D.,Tuddenham,例如，第5版BlackwellPublishing,2005:DifferentialnicheandWntrequirementsduringacutemyeloidleukemia,第1-12页.NewYork.。HSC的表征HSC是未分化的并类似于小淋巴细胞。大部分的HSC是休眠的，处于细胞周期的G0期，这会保护它们免于细胞周期依赖性药物的作用。干细胞的休眠状态由转化生长因子-βTGF-β维持。TGF-β的活性由p53介导，所述p53是调节细胞增殖并靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的肿瘤抑制基因Gordon,M.Stemcellsandhaemopoiesis.见：Hoffbrand,V.,Catovsky,D.,Tuddenham,例如，第5版BlackwellPublishing,2005:DifferentialnicheandWntrequirementsduringacutemyeloidleukemia,第1-12页.NewYork。HSC的休眠不仅对于长时间地保护干细胞区室和维持干细胞库是至关重要的，而且对于使复制相关突变的积累最小化是至关重要的。发现许多维持HSC休眠的固有转录因子与白血病有关。例如，已经在急性髓性白血病中报道了导致FoxO和髓样淋巴样或混合谱系白血病的融合的染色体易位参见，例如，SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。大部分正常的HSC存在于CD34+CD38-CD90+骨髓细胞级分中，也在CD34-Lin-细胞中观察到一些HSC。CD34+CD38+细胞级分含有一些具有短期重新定居（repopulating）活性的HSC。其它公认的标志物包括酪氨酸激酶受体c-kitCD117，以及终末分化标志物诸如CD4和CD8的缺乏Rossi等人,MethodsinMolecularBiology20117502:47-59。HSC的分类可以将造血干细胞库细分成三个主要组：1短期HSC，其能够产生分化细胞的克隆仅4-6周；2中期HSC，其能够在变得消退之前维持分化细胞后代6-8个月；和3长期HSC，其能够无限地维持血细胞生成TestaU.AnnalsofHematology2011903:245-271。血细胞生成血细胞生成是一个高度协调的过程，其中HSC分化成由专门调节性微环境支持的成熟血细胞，所述专门调节性微环境由控制干细胞和祖细胞的命运说明（specification）的组分组成，以及通过供给必要的因子而维持它们的发育“生态位”。本文中使用的术语“骨髓BM生态位”表示一种组织良好的体系结构，其由在不同血细胞谱系的存活、生长和分化中起重要作用的要素例如，成骨细胞、破骨细胞、骨髓内皮细胞、基质细胞、脂肪细胞和细胞外基质蛋白ECM组成。骨髓生态位是一种重要的出生后微环境，HSC在其中增殖、成熟并产生髓样和淋巴样祖细胞。骨髓BM存在于所有动物骨的骨髓腔中。它由多种前体和成熟的细胞类型组成，包括造血细胞成熟的血细胞的前体和基质细胞广范围的结缔组织细胞的前体，它们二者似乎都能够分化成其它细胞类型。骨髓的单核级分含有基质细胞、造血前体和内皮前体。不同于次级淋巴样器官诸如具有独特肉眼可见结构（包括红髓和白髓）的脾，除了含有成骨细胞的骨内膜以外，BM不具有明显的结构特征。骨内膜区域与钙化的硬骨发生接触，并提供对于HSC活性的维持而言必要的特殊微环境KondoM,ImmunologyReviews20102381:37-46;SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。在生态位内，据信HSC接受源自几个来源的支持和生长信号，所述来源包括：成纤维细胞、内皮和网状细胞、脂肪细胞、成骨细胞和间充质干细胞MSC。生态位的主要功能是集成营养物、氧、旁分泌和自分泌信号的局部变化，和响应于来自体循环的信号而改变HSC休眠、运输和或繁殖Broner,F.和Carson,MC.Topicsinbonebiology.Springer.2009;4:第2-4页.NewYork,USA.。尽管真MSC的性质仍然被误解，但是最近报道了表达CXC趋化因子配体12CXCL12的CD146MSC是自我更新的祖先，其存在于窦状表面上并为窦状壁结构的组构做出贡献，产生血管生成素-1Ang-1，且能够产生形成骨内膜生态位的成骨细胞Konopleva,MY,和Jordan,CT,BiologyandTherapeuticTargeting201195:591-599。这些CXCL12网状细胞可以充当在成骨细胞生态位和血管生态位之间穿梭HSC的运输途径，在此处提供必要的但是不同的维持信号。相继于变化的局部产生和通过结合细胞因子的糖胺聚糖的作用，由骨髓MSC产生的细胞因子和趋化因子集中在特定生态位中。在这些中，CXCL12基质细胞衍生因子-1α正调节HSC归巢，而转化生长因子FMS-样酪氨酸激酶3Flt3配体和Ang-1充当休眠因子参见，例如，SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。在形成集落的祖细胞的个体发育以及存活和增殖中，CXCL12-CXCR4信号传递参与HSC归巢进BM中。CXCR4-选择性的拮抗剂诱导HSC活动进外周血中，这进一步指示CXCL12在保留造血器官内的HSC中的作用。BM移植涉及通过BMSC产生的复杂细胞外基质实现的随后细胞间相互作用。因而，血管细胞粘附分子-1VCAM-1或纤连蛋白对于与BM衍生的MSC的粘附而言是至关重要的。以此方式，造血干细胞增殖动力学的控制对于正确造血细胞产生的调节而言是非常重要的。这些控制机制可以分类为干细胞内在的或外在的，或二者的组合参见，例如，SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。HSC自我更新和分化可以由外界因素控制外部控制，诸如造血微环境中的细胞-细胞相互作用或细胞因子，诸如SCF干细胞因子和它的受体c-kit、Flt-3配体、TGF-β、TNF-α等。细胞因子通过多个信号转导途径的活化而调节多种造血细胞功能。与细胞增殖和分化有关的主要途径是Janus激酶Jak信号传导蛋白和转录激活物STAT、促分裂原活化蛋白MAP激酶和磷脂酰肌醇PI3-激酶途径SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。另外，已经证实其它转录因子（例如，干细胞白血病SCL造血转录因子;GATA-2；和在细胞周期控制中涉及的基因产物，诸如细胞周期蛋白依赖性的激酶抑制剂CKIpl6、p21和p27）的表达对于从最早阶段的造血细胞发育而言是必需的内在控制SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。Notch-l-Jagged途径可以用于将细胞外信号与细胞内信号传递和细胞周期控制整合。Notch-1是在造血干细胞膜上的表面受体，其结合它的配体，在基质细胞上的Jagged。这导致Notch-1的细胞质部分的切割，其然后可以充当转录因子Gordon,M.Stemcellsandhaemopoiesis.见：Hoffbrand,V.,Catovsky,D.,Tuddenham,例如，第5版BlackwellPublishing,2005:DifferentialnicheandWntrequirementsduringacutemyeloidleukemia,第1-12页.NewYork.。使用骨髓BM造血干细胞HSC移植治疗的病症使用骨髓BM造血干细胞HSC移植治疗的病症包括、但不限于，急性髓性白血病AML、急性成淋巴细胞性白血病ALL、慢性淋巴细胞白血病CLL、慢性髓性白血病CML、周围T细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性的遗传性和获得性骨髓病症例如镰刀状细胞贫血、β-重型地中海贫血、顽固性Diamond-Blackfan贫血、骨髓增生异常综合征、特发性重度再生障碍性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范科尼贫血、巨核细胞缺乏（amegakaryocytosis）或先天性血小板减少症、多发性骨髓瘤和重症联合免疫缺陷SCID。造血恶性肿瘤大多数造血恶性肿瘤包含在功能上异质的细胞，其中仅一个子集（被称作癌症干细胞）负责肿瘤维持。因为它们具有暗示正常组织干细胞的特性，包括自我更新、延长的存活和产生具有更分化特征的细胞的能力，癌症干细胞因此得名JonesRJ和ArmstrongSA,BiolBloodMarrowTransplant.2008年1月;14增刊1:12-16。在造血干细胞中的转化事件可以产生几种不同的恶性肿瘤，包括、但不限于，慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、急性髓性白血病和可能的甚至急性淋巴细胞白血病，取决于与致癌影响有关的分化程度JonesRJ和ArmstrongSA,BiolBloodMarrowTransplant.2008年1月;14增刊1:12-16。癌症干细胞概念是基于以下想法：特定组织的肿瘤经常似乎“尝试”重演在起源组织中发现的细胞异质性，且因而在所述肿瘤中存在干细胞样的细胞，从而产生不同的细胞类型。该假设的根本检验是，肿瘤细胞是否可以分离成具有再生所述肿瘤的能力的细胞，和不具有该能力的细胞。这种细胞分层最近已经在急性髓性白血病中得到证实，其中一些AML含有具有独特免疫表型的细胞，其能够在免疫缺陷的小鼠中引发白血病，而大多数细胞不能引发白血病发生。此外，引发白血病的细胞也会产生已经丧失肿瘤引发活性且因而重演在原始肿瘤中发现的细胞异质性的细胞LapidotT等人,Nature.1994;367:645-648;BonnetD等人,NatMed.1997;3:730-737。急性髓性白血病急性髓性白血病AML是一种克隆病症，其特征在于髓样谱系中的分化阻止以及未成熟的祖先在骨髓中的积累，从而产生造血衰竭PollyeaDA等人,BritishJournalofHaematology20111525:523-542。在白血病胚细胞的出现中存在广泛的患者间异质性。白血病引发细胞在急性髓性白血病AML中的发现开始于下述发现：大多数AML胚细胞不会增殖，且仅少数能够形成新集落TestaU,AnnalsofHematology2011903:245-271。所有AML情况的一个共同特征是，被阻止的异常分化导致超过20%的胚细胞在骨髓中积累Gilliland,DG和TallmanMS,CancerCell200215:417-420。超过80%的髓样白血病与至少一次染色体重排有关PandolfiPP,Oncogene20012040:5726-5735，并且已经克隆了超过100个不同的染色体易位Gilliland,DG和TallmanMS,CancerCell200215:417-420。这些易位经常包含编码转录因子的基因，所述转录因子已经被证实在造血谱系发生中起重要作用。因而，转录机制的改变似乎是导致阻止的分化的共同机制PandolfiPP,Oncogene20012040:5726-5735;TenenDG,NatureReviewsofCancer200332:89-101。临床研究和实验动物模型提示，急性白血病的临床表现需要至少两个遗传改变。根据Gilliland和Tallman提出的模型CancerCell200215:417-420，I类活化突变和诱导分化终止的II类突变之间的协作会产生AML。I类突变，诸如受体酪氨酸激酶基因FLT3和KIT、RAS家族成员中的突变以及神经纤维瘤蛋白1的功能丧失，会给造血祖细胞赋予增殖和或存活优点，通常作为信号转导途径的异常活化的后果。所述II类突变通过转录因子或辅激活因子的干扰导致分化的停止FrankfurtO等人,CurrentOpinioninOncology2007196:635-649。尽管白血病干细胞LSC似乎具有许多以前为HSC鉴别出的细胞表面标志物诸如CD34、CD38、HLA-DR和CD71，几个研究组已经报道了在两个群体中差别地表达的表面标志物。例如，已经将CD90或Thy-1描述为LSC区室的潜在特异性的。随着大多数原始干细胞向祖先阶段进展，Thy-1在正常血细胞生成中下调HopeKJ等人,ArchivesofMedicalResearch2003346:507-514。CXCL12基质细胞衍生因子-1α和它在白血病祖细胞上的受体CXCR4之间的相互作用会促进它们向骨髓微环境的归巢。CXCR4水平在来自具有AML的患者的白血病细胞中显著升高，且CXCR4表达与差的结果有关KonoplevaMY和JordanCT,BiologyandTherapeuticTargeting2011295:591-599。在原代人AML干细胞中的核因子κβNF-kβ途径的组成性活化证实，NF-kβ在LSC以及一般AML细胞类型的总存活中起重要作用KonoplevaMY和JordanCT,BiologyandTherapeuticTargeting2011295:591-599。FLT3（III类酪氨酸激酶受体家族的一个成员）在正常的造血祖细胞中以及在白血病胚细胞中表达，并且它在细胞增殖、分化和存活中起重要作用。FLT3配体对FLT3受体的活化导致受体二聚化和磷酸化以及下游信号传递途径（包括Janus激酶JAK2信号转导蛋白JAK2、信号转导蛋白和转录活化剂STAT5和促分裂原活化蛋白激酶MAPK途径）的活化。据信在FLT3基因（存在于大约40%的具有AML的患者中）中的突变会促进它的自磷酸化和组成性活化，从而导致独立于配体的增殖FrankfurtO等人,CurrentOpinioninOncology2007196:635-649。淋巴样恶性肿瘤在大多数组织中的自我更新能力随着细胞进展穿过它们的正常分化阶段而丢失；例如，超过造血干细胞水平的髓样谱系血细胞不再具有自我更新能力。自我更新的分化相关丢失的一个显著例外是淋巴样系统，其中在记忆淋巴细胞阶段之前保留自我更新能力，以便维持终生免疫记忆FearonDT等人,Science.2001;293:248-250;LuckeyCJ等人,ProcNatlAcadSciUSA.2006;103:3304-3309。体细胞超突变充当B细胞恶性肿瘤起源的分化阶段的标志物。一般而言，体细胞超突变的存在会将肿瘤鉴别为已经起源于生发中心或生发中心后B细胞，而突变的缺失会鉴别生发中心前B细胞。不同于髓样恶性肿瘤，而是与谱系的保留的自我更新能力一致，免疫球蛋白Ig突变图谱提示，B细胞恶性肿瘤可以起源于遍布B细胞分化阶段的细胞LapidotT等人,Nature.1994;367:645-648;BonnetD和DickJE,NatMed.1997;3:730-737;JonesRJ等人,JNatlCancerInst.2004;96:583-585。多发性骨髓瘤MM通常被视作恶性浆细胞的疾病，具有由浆细胞块（plasmacellbulk）引起的疾病的许多临床后果。但是，正常浆细胞是终末分化的且缺乏自我更新能力，并且30年来已经清楚，仅少数来自小鼠和人MM的细胞是产生克隆的。这些罕见的产生克隆的细胞已经被称作“肿瘤干细胞”ParkCH等人,JNatlCancerInst.1971;46:411-422;HamburgerAWandSalmonSE,Science.1977;197:461-463。MM浆细胞起源于类似于记忆B细胞的自我更新的癌症干细胞的小群体。不仅这些克隆型B细胞在大多数患者中循环，而且它们也耐受许多标准的抗-MM剂，且因而似乎引起大多数疾病复发MatsuiWH等人,Blood.2004;103:2332-2336;KukrejaA等人,JExpMed.2006;203:1859-1865;JonesRJ和ArmstrongSA,BiolBloodMarrowTransplant.2008年1月;14增刊1:12-16。Reed-SternbergRS细胞（霍奇金淋巴瘤HL的标志）是浆细胞以外的偶尔表达CD138的唯一血液细胞CarboneA等人,Blood.1998;92:2220-2228。已经证实，HL细胞系包括缺乏存在于剩余细胞上的RS标志物CD15和CD30的细胞的小群体，但是表达与记忆B细胞表型一致的标志物NewcomSR等人,IntJCellCloning.1988;6:417-431;JonesRJ等人,Blood.2006;108:470。表型记忆B细胞的该小亚群具有在HL细胞系内的所有产生克隆的能力。大多数HL患者（包括具有早期疾病的那些）携带循环记忆B细胞，其具有与患者的RS细胞相同的克隆Ig基因重排JonesRJ等人,Blood.2006;108:470;JonesRJ和ArmstrongSA,BiolBloodMarrowTransplant.2008年1月;14增刊1:12-16。这些数据提示，这些克隆型记忆B细胞可能代表HL干细胞。造血干细胞HSC被用在骨髓移植中用于治疗血液学恶性肿瘤以及非恶性病症Warner等人,Oncogene20042343:7164-7177。在研究人员发现哪些细胞组分在骨髓抑制的患者中负责供体造血系统和免疫系统的移植物植入之前，已经将骨髓BM作为未分级分离的细胞库移植了许多年参见，例如，SérgioPauloBydlowski和FelipedeLaraJanz2012.HematopoieticStemCellinAcuteMyeloidLeukemiaDevelopment,AdvancesinHematopoieticStemCellResearch,Dr.RosanaPelayo编,ISBN:978-953-307-930-1。用于骨髓造血干细胞BMHSC移植的患者的准备或调理是所述程序的一个至关重要的要素。它起两个主要作用：1它提供患者的适当免疫抑制并在骨髓中为移植的HSC清除足够生态位空间，这允许将移植的细胞移入接受者中；和2它经常帮助根除恶性肿瘤的来源。传统上已经如下实现患者的调理：在有或没有辐射下施用最大耐受剂量的化学治疗剂的混合物。经常将混合物的组分选择成具有不重叠的毒性。目前在使用中的所有准备方案是有毒的，且具有可以危及生命的严重副作用。这些副作用包括粘膜炎、恶心和呕吐、脱发、腹泻、疹、周围神经病、不育、肺毒性和肝毒性。这些副作用中的许多对于老年和患病的患者而言是特别危险的，且经常在决定患者是否将接受移植时变成决定性组分。因而，需要在没有这些毒性的情况下准备或调理适合骨髓造血干细胞BMHSC移植的患者。所述的发明提供了使用双特异性抗体消除患者中的造血干细胞造血祖细胞HSCHP的组合物和方法，所述双特异性抗体结合人酪氨酸激酶受体FLT3FLK2受体蛋白和在T-细胞上表达的CD3受体蛋白。发明概述根据一个方面，所述的发明提供了一种为造血细胞移植准备或调理有此需要的患者的方法，所述方法包括：提供结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体，和给所述患者施用治疗量的包含所述双特异性抗体的药物组合物；其中所述治疗量有效地：使外周血中表达CD45、CD3、FLT3、CD19、CD33中的一种或多种的细胞群体的水平减小至少90%，和减小用于准备或调理所述患者的方案的毒性。根据一个实施方案，结合FLT3的双特异性抗体的抗原结合部分的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:1，且结合FLT3的双特异性抗体的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:2。根据另一个实施方案，所述双特异性抗体包含与人CD3的亚基反应的单克隆抗体。根据另一个实施方案，所述双特异性抗体或其抗原结合部分包含选自免疫球蛋白GIgG、IgM、IgE、IgA和IgD同种型的同种型。根据一个实施方案，所述有效量包含0.01mgkg至10mgkg，更好是0.05mgkg至2mgkg，更好是0.1mgkg至0.5mgkg，更好是0.1mgkg至0.3mgkg，更好是0.1mgkg。根据一个实施方案，有此需要的患者遭受急性髓性白血病AML、急性成淋巴细胞性白血病ALL、慢性髓性白血病CLL、CML、周围T细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性的遗传性和获得性骨髓病症、多发性骨髓瘤或SCID。根据另一个实施方案，所述非恶性的遗传性和获得性骨髓病症选自镰刀状细胞贫血、β-重型地中海贫血、顽固性Diamond-Blackfan贫血、骨髓增生异常综合征、特发性重度再生障碍性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范科尼贫血、巨核细胞缺乏和先天性的血小板减少症。根据一个实施方案，所述组合物还包含抗肿瘤剂。根据一个实施方案，所述双特异性抗体是人源化抗体。根据另一个方面，所述的发明提供了一种用于制备结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体的方法，所述方法包括：将Flt3单克隆抗体的Fab抗原结合片段的C-端连接至IgG1的CH2结构域，和将与人CD3的亚基UCHT1反应的单克隆抗体的单链可变片段ScFv连接至所述IgG1的CH2结构域。根据另一个方面，所述的发明提供了一种结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体，其包含：与IgG1的CH2结构域连接的Flt3单克隆抗体的Fab抗原结合片段的C-端，和与所述IgG1的CH2结构域连接的、与人CD3的亚基UCHT1反应的单克隆抗体的单链可变片段ScFv。根据一个实施方案，Fab抗原结合片段的重链结合结构域的氨基酸序列是SEQIDNO:1H3113，且Fab抗原结合片段的轻链结合结构域的氨基酸序列是SEQIDNO:2L3133。根据另一个方面，所述的发明提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:5，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:7。根据另一个方面，所述的发明提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:9，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:11。根据另一个方面，所述的发明提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:13，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:15。根据另一个方面，所述的发明提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:17，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:19。根据一个实施方案，所述抗体或其片段的半数最大有效浓度EC50是在1ngmL6.25pM和2,000ngmL12.5nM之间。根据另一个实施方案，所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在10ngmL62.5pM和200ngmL1.25nM之间。根据另一个实施方案，结合细胞上的人FLT3FLK2受体蛋白的FLT3抗体对于所述细胞内化结合的抗体或抗原结合片段而言是有效的。附图简述图1.1A和1B:氨基酸诸如苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的天然荧光。1C:合成的抗体的纯度的测量。图2.施用双特异性抗体（其结合由HSCHP表达的FLT3FLK2和由T-细胞表达的CD3）会减小人源化的免疫受损的小鼠的外周血中的嵌合性水平。2A.在施用CD3-FLT3双特异性抗体以前对照；上行和以后3周，人源化的NOG小鼠的外周血的流式细胞计量术分析的一个实例。从左至右：人hCD45+细胞总CD45+细胞的百分比、人hCD3+细胞总hCD45+细胞的百分比;T-细胞、人hCD19+细胞总hCD45+细胞的百分比;B-细胞、人hCD33+细胞总hCD45+细胞的百分比；髓样细胞的量的分析。2B.双特异性抗体施用对人源化小鼠的外周血中的嵌合性水平的影响n=27。2C.双特异性抗体施用对外周血中T-细胞总hCD45+细胞的%hCD3+细胞、B-细胞总hCD45+细胞的%hCD19+细胞和髓样谱系总hCD45+细胞的%hCD33+细胞的水平的影响n=27。2D.双特异性抗体应用在具有减少的量的人hCD3+细胞的人源化的免疫受损的小鼠在C中用星号标记中的减小的效应n=3。图3.来自克隆地扩增的杂交瘤的培养物上清液的筛选。3A.从9个阳性杂交瘤克隆的上清液的流式细胞计量术分析得到的荧光强度直方图。上清液表现出对由REH人B细胞前体白血病细胞，从具有第一次ALL复发的15岁女孩的外周血建立细胞表达的FLT3FLK2的免疫反应性。3B.该表显示了3A中的直方图的中间荧光强度MFI。所有9个克隆与表达人FLT3FLK2受体蛋白的REH细胞反应。图4.来自繁殖的杂交瘤的经纯化的单克隆抗体的筛选.4A.来自9个阳性杂交瘤克隆的经纯化的单克隆抗体的流式细胞计量术分析所得到的荧光强度直方图。上清液表现出对由SP20细胞表达的人FLT3FLK2受体蛋白的免疫反应性。单克隆抗体与不表达人FLT3FL2受体蛋白的野生型SP20细胞没有反应性。4B.该表显示了4A中的直方图的中间荧光强度MFI。所有9个克隆与表达人FLT3FLK2受体蛋白的SP20细胞反应，且不与野生型SP20细胞反应。图5.使用流式细胞计量术通过有效浓度EC曲线确定的抗-人FLT3FLK2抗体的亲和力。5A.抗体克隆Ab2-81。5B.抗体克隆Ab1-23DA。5C.抗体克隆Ab3-16HA。5D.抗体克隆Ab0-30A。5E.抗体克隆Ab1-18New。图6.抗-FLT3FLK2抗体内化的时程.对于活的Reh细胞群体，用第二AlexaFluor488检测的单克隆小鼠抗-人CD135抗体的平均荧光强度MFI，相对于时间绘图。与对照细胞平行地在37℃进行内化测定，所述对照细胞在冰上在4℃保持10、30、60和120分钟。在4℃和37℃一式三份地历时2小时，将每种抗体克隆123D、A281A、330A和316HA的MFI的变化百分比相对于时间绘图，将在10分钟的MFI设定为100%。发明详述术语表术语“活化”或“淋巴细胞活化”表示特异性抗原、非特异性促分裂原或同种异体细胞对淋巴细胞的刺激，从而导致RNA、蛋白和DNA的合成以及淋巴因子的产生；继之以各种效应细胞和记忆细胞的增殖和分化。例如，成熟的B细胞可以通过遇到抗原而活化，所述抗原表达被它的细胞表面免疫球蛋白（Ig）识别的表位。所述活化过程可以是一个直接的过程，其依赖于抗原对膜Ig分子的交联交联依赖性的B细胞活化，或是一个间接的过程，其在与辅助性T细胞的亲密相互作用的背景下更有效地发生“关连物帮助过程”。T-细胞活化依赖于TCRCD3复合物与它的关连配体（结合在I类或II类MHC分子的槽中的肽）的相互作用。通过受体接合启动的分子事件是复杂的。最早的步骤似乎是酪氨酸激酶的活化，其导致一组控制几个信号传递途径的底物的酪氨酸磷酸化。这些包括一组将TCR连接至ras途径的衔接蛋白，磷脂酶Cγ1（其酪氨酸磷酸化会增加它的催化活性和接合肌醇磷脂代谢途径，从而导致细胞内游离钙浓度的升高和蛋白激酶C的活化），和一系列控制细胞的生长和分化的其它酶。除了受体接合以外，T细胞的完全应答性要求辅助细胞递送的共刺激活性，例如，在抗原呈递细胞APC上的CD80和或CD86对T细胞上的CD28的接合。活化的B淋巴细胞的可溶性产物是免疫球蛋白抗体。活化的T淋巴细胞的可溶性产物是淋巴因子。抗体：抗体是这样的血清蛋白：其分子具有与在它们的靶标上的小化学基团互补的它们的表面的小区域。在这些互补区域被称作抗体结合位点或抗原结合位点中，每个抗体分子存在至少2个，且在某些类型的抗体分子中，10个、8个，或在某些种类中多达12，可以与在抗原上的它们的对应互补区域抗原决定簇或表位反应以将多价抗原的几个分子连接在一起从而形成网格。完整抗体分子的基础结构单元由4个多肽链组成：2个相同的轻L链每个含有约220个氨基酸和2个相同的重H链每个通常含有约440个氨基酸。所述2个重链和2个轻链通过非共价键和共价键二硫键的组合而保持在一起。所述分子由2个相同的半部组成，每个半部具有相同的抗原结合位点，该位点由轻链的N-端区域和重链的N-端区域组成。轻链和重链经常协作以形成抗原结合表面。人抗体表现出两类轻链κ和λ；单个免疫球蛋白分子通常是仅一个或另一个。在正常血清中，已经发现60%的分子具有κ决定簇和30%的λ。已经发现许多其它种类表现出两类轻链，但是它们的比例不同。例如，在小鼠和大鼠中，λ链占总数的几个百分比；在狗和猫中，κ链是非常低的；马似乎不具有任何κ链；兔可能具有5-40%λ，取决于品系和b-基因座同种异型；且鸡轻链与λ的同源性高于κ。在哺乳动物中，存在5个抗体IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类别，每一类具有它自己的重链类别-α对于IgA、δ对于IgD、ε对于IgE、γ对于IgG和μ对于IgM。另外，存在4个分别具有γ1、γ2、γ3和γ4重链的IgG免疫球蛋白亚类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。在它的分泌形式，IgM是由5个4-链单元组成的五聚体，从而给它提供总计10个抗原结合位点。每个五聚体含有J链的一个拷贝，其共价地插入在2个邻近的尾巴区域之间。所有5个免疫球蛋白类别与其它血清蛋白的差别在于，它们表现出宽范围的电泳迁移率且不是均匀的。该异质性–单个IgG分子，例如，在净电荷上彼此不同–是免疫球蛋白的固有性质。“抗原决定簇”或“表位”是在分子上的抗原位点。连续的抗原决定簇表位基本上是直链的。在有序结构（诸如螺旋聚合物或蛋白）中，抗原决定簇表位基本上是在所述结构的表面内部或上面的有限区域或补丁，其包含来自要彼此亲密接触的分子的不同部分的氨基酸侧链。这些是构象决定簇。互补性（其经常被比喻为钥匙在锁中的配合）的原理涉及相对弱的结合力疏水键和氢键、范德华力和离子相互作用，其仅在以下情况时能够有效地起作用：两个反应分子可以彼此非常近地接近，且实际上，如此接近以致于一个分子的伸出的组分原子或原子基团可以配合进另一个分子的互补凹陷或凹处。抗原-抗体相互作用表现出高度的特异性，这在许多水平表现出来。降低至分子水平，“特异性”是指抗体与抗原的结合位点具有互补性，一点也不类似于无关抗原的抗原决定簇。每当2种不同抗原的抗原决定簇具有某种结构相似性时，可能发生一种决定簇向另一种决定簇的某些抗体的结合位点中的某种程度的配合，并且该现象产生交叉反应。交叉反应在理解抗原-抗体反应的互补性或特异性时具有重大重要性。免疫学特异性或互补性使得可能检测抗原中的少量杂质污染。可以如下产生“单克隆抗体”mAb：使来自经免疫的供体的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系融合，以产生建立的小鼠杂交瘤克隆，其在选择性培养基中生长。“杂交瘤细胞”是一种永生化的杂交细胞，其源自分泌抗体的B细胞与骨髓瘤细胞的体外融合。“体外免疫接种”（其表示培养的抗原特异性B细胞的初次活化）是另一种非常确定的生产小鼠单克隆抗体的方式。通过聚合酶链式反应PCR扩增，也可以扩增来自外周血淋巴细胞的免疫球蛋白重VH和轻Vκ和Vλ链可变基因的不同文库。通过使用PCR随机地组合重链和轻链V-基因，可以制备编码单个多肽链的基因，在所述多肽链中，重链和轻链可变结构域通过多肽间隔物相连单链Fv或scFv。然后可以克隆组合文库用于如下展示在丝状噬菌体的表面上：通过融合至在所述噬菌体的尖部处的小外壳蛋白。经引导的选择的技术是基于用啮齿动物免疫球蛋白V基因改组人免疫球蛋白V基因。所述方法需要：i用可与目标抗原反应的小鼠单克隆抗体的重链可变区VH结构域改组人λ轻链的清单；ii在该抗原上选择半-人Fab；iii使用选择的λ轻链基因作为在第二次改组中的人重链文库的“入坞结构域”，以分离具有人轻链基因的克隆Fab片段；v通过用含有所述基因的哺乳动物细胞表达载体电穿孔，转染小鼠骨髓瘤细胞；和vi在小鼠骨髓瘤中表达可与所述抗原反应的Fab的V基因作为完整IgG1,λ抗体分子。当与细胞表面结合的抗体与天然杀伤NK细胞上的Fc受体相互作用时，触发本文中使用的术语“抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性ADCC”。NK细胞表达受体FcγRIIICD16，其识别IgG1和IgG3亚类。杀伤机制类似于细胞毒性T细胞的杀伤机制，涉及含有穿孔蛋白和颗粒蛋白酶的细胞质颗粒的释放参见下文。CD3TCR复合物是由4个不同链组成的蛋白复合物。在哺乳动物中，所述复合物含有1个CD3γ链、1个CD3δ链和2个CD3ε链，它们与T细胞受体TCR和ζ-链结合以在T淋巴细胞中产生活化信号。TCR、ζ-链和CD3分子一起形成TCR复合物。CD3分子的细胞内尾巴含有被称作基于免疫受体酪氨酸的活化基序ITAM的保守基序，它是TCR的信号传递能力所必需的。在ITAM的磷酸化后，CD3链可以结合ZAP70ζ相关蛋白，即在T细胞的信号传递级联中涉及的一种激酶。术语“造血细胞移植”HCT在本文中用于表示血液和骨髓移植BMT，即包含输注细胞造血干细胞；也称为造血祖细胞以重构患者的造血系统的程序。术语“淋巴细胞”表示在遍布体内的淋巴组织中形成的小白血细胞，且在正常的成年人中占在循环血液中的白细胞的总数的约22-28%，其在防御身体免于疾病中起重要作用。各种淋巴细胞是专门化的，因为它们被定型为对结构上相关的抗原的有限集合做出应答。该定型（其在免疫系统与给定抗原的第一次接触之前存在）通过对抗原上的决定簇表位特异性的受体在淋巴细胞的表面膜上的存在来表达。每种淋巴细胞具有一群受体，它们都具有相同的结合位点。淋巴细胞的一个集合或克隆与另一个克隆的差别在于它的受体的结合区域的结构，且因而差别在于它可以识别的表位。淋巴细胞彼此的差别不仅在于它们的受体的特异性，而且在于它们的功能。识别出了两大类淋巴细胞：B-淋巴细胞B-细胞，它们是分泌抗体的细胞的前体；和T-淋巴细胞T-细胞。B淋巴细胞B-淋巴细胞源自骨髓的造血细胞。成熟的B-细胞可以用抗原活化，所述抗原表达被它的细胞表面识别的表位。所述活化过程可以是直接的，依赖于抗原对膜Ig分子的交联交联依赖性的B-细胞活化；或间接的，经由与辅助性T-细胞的相互作用，在被称作关连物（cognate）帮助的过程中。在许多生理学情形中，受体交联刺激和关连物帮助协同作用以产生更强烈的B-细胞应答Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。交联依赖性的B-细胞活化要求，所述抗原表达与细胞表面受体的结合位点互补的表位的多个拷贝，因为每个B-细胞表达具有相同可变区的Ig分子。这样的要求由具有重复表位的其它抗原（诸如微生物的荚膜多糖或病毒包膜蛋白）实现。交联依赖性的B-细胞活化是针对这些微生物产生的主要保护性免疫应答Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。关连物帮助允许B-细胞产生针对不可交联受体的抗原的应答，且与此同时，提供从灭活中挽救B细胞的共刺激信号（当它们被弱交联事件刺激时）。关连物帮助依赖于B-细胞的膜免疫球蛋白Ig对抗原的结合、所述抗原的胞吞作用和它在细胞的胞内体溶酶体区室中向肽的片段化。一些得到的肽被加载进细胞表面蛋白（被称作II类主要组织相容性复合物MHC分子）的专门集合中的槽中。得到的II类肽复合物在细胞表面上表达，并充当一组T-细胞（被命名为CD4+T-细胞）的抗原特异性受体的配体。CD4+T-细胞在它们的表面上带有对B-细胞的II类肽复合物特异性的受体。B-细胞活化不仅依赖于T细胞通过它的T细胞受体TCR的结合，而且该相互作用也允许在T-细胞上的活化配体CD40配体结合它在发出B-细胞活化信号的B-细胞CD40上的受体。另外，T辅助细胞会分泌几种细胞因子，它们通过结合B细胞上的细胞因子受体而调节受刺激的B-细胞的生长和分化Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。在抗体产生的关连物帮助过程中，CD40配体在活化的CD4+T辅助细胞上短暂地表达，并且它结合抗原特异性的B细胞上的CD40，由此转导第二共刺激信号。后一种信号对于B细胞生长和分化以及对于记忆B细胞的产生（通过阻止已经遇到抗原的生发中心B细胞的细胞凋亡）而言是必需的。在B和T细胞中的CD40配体的过表达涉入人SLE患者中的病原性自身抗体产生Desai-Mehta,A.等人,“HyperexpressionofCD40ligandbyBandTcellsinhumanlupusanditsroleinpathogenicautoantibodyproduction,”J.Clin.Invest.,979:2063-20731996。T-淋巴细胞T-淋巴细胞源自造血组织中的前体，在胸腺中经历分化，然后被播种至周围淋巴组织和淋巴细胞的再循环池。T-淋巴细胞或T细胞介导宽范围的免疫学功能。这些包括辅助B细胞发育成抗体生产细胞的能力，增加单核细胞巨噬细胞的杀微生物作用的能力，抑制某些类型的免疫应答，指导靶细胞的杀伤，和动员炎症应答。这些效应依赖于它们对特定细胞表面分子的表达和细胞因子的分泌Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。T细胞与B细胞的差别在于它们的抗原识别机制。免疫球蛋白（B细胞的受体）结合在可溶性分子上或在微粒表面上的各种表位。B-细胞受体见到在天然分子的表面上表达的表位。抗体和B-细胞受体参与结合和保护免于细胞外流体中的微生物。相反，T细胞识别在其它细胞的表面上的抗原，并通过与这些抗原呈递细胞APC相互作用和改变这些抗原呈递细胞APC的行为而介导它们的功能。在周围淋巴样器官中存在三种主要的可以活化T细胞的抗原呈递细胞类型：树突细胞、巨噬细胞和B细胞。这些中最有效的是树突细胞，其唯一功能是将外来抗原呈递给T细胞。未成熟的树突细胞位于遍布体内的组织中，包括皮肤、肠道和呼吸道。当它们在这些部位遇到入侵微生物时，它们会内吞病原体和它们的产物，并将它们经由淋巴携带至局部淋巴结或肠道有关的淋巴样器官。与病原体的相遇会诱导树突细胞从抗原捕获细胞成熟为可以活化T细胞的抗原呈递细胞APC。APC在它们的表面上展示三类蛋白分子，它们在活化T细胞以变成效应细胞中起作用：1MHC蛋白，其将外来抗原呈递给T细胞受体；2共刺激蛋白，其结合在T细胞表面上的互补受体；和3细胞-细胞粘附分子，其使T细胞能够结合抗原呈递细胞APC足够变得活化的时间长度“Chapter24:Theadaptiveimmunesystem,”MolecularBiologyoftheCell,Alberts,B.等人,GarlandScience,NY,2002。基于它们表达的细胞表面受体，将T-细胞细分成两个不同类别。大部分的T细胞表达由□和□链组成的T细胞受体TCR。小部分的T细胞表达由□和□链组成的受体。在□□T细胞中存在两个重要的亚系：表达共受体分子CD4的那些CD4+T细胞；和表达CD8的那些CD8+T细胞。这些细胞的差别在于它们如何识别抗原和它们的效应功能和调节功能。CD4+T细胞是免疫系统的主要调节细胞。它们的调节功能依赖于它们的细胞表面分子（诸如CD40配体，在T细胞被活化时诱导其表达）的表达和它们当被活化时分泌的广泛种类的细胞因子。T细胞也介导重要的效应子功能，其中的一些取决于它们分泌细胞因子的方式。所述细胞因子可以是对靶细胞直接有毒的，且可以动员有效的炎症机制。另外，T细胞、特别是CD8+T细胞可以发育成细胞毒性的T-淋巴细胞CTL，其能够有效地裂解表达被所述CTL识别的抗原的靶细胞Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。T细胞受体TCR会识别由肽组成的复合物，所述肽源自与II类或I类MHC蛋白的专门槽结合的抗原的蛋白酶解。CD4+T细胞仅识别肽II类复合物，而CD8+T细胞识别肽I类复合物Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。TCR的配体即，肽MHC蛋白复合物在抗原呈递细胞APC内产生。一般而言，II类MHC分子结合从蛋白衍生出的肽，所述蛋白已经通过胞吞过程被APC摄入。这些加载肽的II类分子然后在细胞表面上表达，在此处它们可供具有TCR的CD4+T细胞结合，所述TCR能够识别表达的细胞表面复合物。因而，CD4+T细胞被专门化成与源自细胞外来源的抗原反应Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。相反，I类MHC分子主要加载从内部合成的蛋白（诸如病毒蛋白）衍生出的肽。这些肽通过蛋白体的蛋白酶解而从细胞溶质蛋白产生，并转移进糙面内质网中。这样的肽（通常是9个氨基酸的长度）结合进I类MHC分子且到达细胞表面，在此处它们可以被表达适当受体的CD8+T细胞识别。这赋予T细胞系统，特别是CD8+T细胞，检测表达特定蛋白的细胞的能力，所述特定蛋白不同于所述生物体的其它部分的细胞的蛋白（例如，病毒抗原）或突变抗原（诸如活跃的癌基因产物）或以比其大得多的量产生，即使处于它们的完整形式的这些蛋白既不在细胞表面上表达也不分泌Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。还可以基于它们作为以下细胞的功能将T细胞分类：辅助性T细胞；参与诱导细胞免疫的T细胞；抑制性T细胞；和细胞毒性T细胞。辅助性T细胞辅助性T细胞是刺激B细胞以产生对蛋白和其它T细胞依赖性抗原的抗体应答的T细胞。T细胞依赖性抗原是这样的免疫原：其中各个表位出现仅一次或有限次数，使得它们不能交联B细胞的膜免疫球蛋白Ig或无效。B细胞通过它们的膜Ig结合抗原，且所述复合物经历胞吞作用。在胞内体和溶酶体区室内，所述抗原被蛋白水解酶片段化为肽，且一个或多个产生的肽被加载进II类MHC分子中，其通过该囊区室运输。然后将得到的肽II类MHC复合物输出至B-细胞表面膜。具有对肽II类分子复合物特异性的受体的T细胞会识别在B-细胞表面上的该复合物Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。B-细胞活化依赖于T细胞通过它的TCR的结合以及T-细胞CD40配体CD40L与B细胞上的CD40的相互作用。T细胞不会组成性地表达CD40L。相反，作为与APC的相互作用的结果而诱导CD40L表达，所述APC表达被T细胞的TCR识别的关连抗原和CD80或CD86。CD80CD86通常由活化的（但是非休眠的）B细胞表达，使得涉及活化的B细胞和T细胞的辅助相互作用可以导致有效的抗体产生。但是，在许多情况下，在T细胞上的CD40L的初始诱导依赖于它们对组成性地表达CD8086的APC（诸如树突细胞）的表面上的抗原的识别。这样的活化的辅助性T细胞然后可以与B细胞有效地相互作用并辅助B细胞。在B细胞上的膜Ig的交联（即使是无效的）可能与CD40LCD40相互作用协作以产生强烈的B-细胞活化。在B-细胞应答中的后续事件，包括增殖、Ig分泌和表达的Ig类别的类别转换（依赖于T细胞-衍生的细胞因子的作用或者被所述作用增强）Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。CD4+T细胞倾向于分化成主要分泌细胞因子IL-4、IL-5、IL-6和IL-10的细胞TH2细胞，或分化成主要产生IL-2、IFN-□和淋巴毒素的细胞TH1细胞。TH2细胞非常有效地辅助B-细胞发育成抗体生产细胞，而TH1细胞是细胞免疫应答的有效诱导物，涉及单核细胞和巨噬细胞的杀微生物活性的增强以及由此造成的增加的在细胞内囊区室中裂解微生物的效率。尽管具有TH2细胞的表型即，IL-4、IL-5、IL-6和IL-10的CD4+T细胞是有效的辅助细胞，但是TH1细胞也具有成为辅助细胞的能力。Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。参与诱导细胞免疫的T细胞T细胞也可以起作用来增强单核细胞和巨噬细胞的破坏细胞内微生物的能力。具体地，由辅助性T细胞产生的干扰素-γIFN-□会增强几种机制（单核吞噬细胞通过所述机制破坏细胞内细菌和寄生现象），包括一氧化氮的产生和肿瘤坏死因子TNF产生的诱导。TH1细胞有效地增强杀微生物作用，因为它们产生IFN-□。相反，由TH2细胞产生的两种主要细胞因子IL-4和IL-10会阻断这些活性。Paul,W.E.,“Chapter1:Theimmunesystem:anintroduction,”FundamentalImmunology,第4版,Paul,W.E.编,Lippicott-RavenPublishers,Philadelphia1999。抑制性或调节性TTreg细胞免疫应答的起始和下调之间的受控平衡对于维持免疫体内稳态是重要的。细胞凋亡和T细胞无反应性一种耐受机制，其中T细胞在遇到抗原后固有地在功能上灭活Scwartz,R.H.,“Tcellanergy,”Annu.Rev.Immunol.,21:305-3342003是促进免疫应答下调的重要机制。第三种机制由抑制性或调节性CD4+TTreg细胞对活化的T细胞的活跃抑制提供综述在Kronenberg,M.等人,“Regulationofimmunitybyself-reactiveTcells,”Nature435:598-6042005。组成性地表达IL-2受体αIL-2R□链的CD4+TregCD4+CD25+是无变应性的和抑制性的天然存在的T细胞子集Taams,L.S.等人,“Human无变应性的suppressiveCD4+CD25+Tcells:ahighlydifferentiatedandapoptosis-pronepopulation,”Eur.J.Immunol.,31:1122-11312001。CD4+CD25+Treg的除去在小鼠中产生全身性自身免疫病。此外，这些Treg的转移会阻止自身免疫病的发展。人CD4+CD25+Treg（类似于它们的鼠关连物）在胸腺中产生，且特征在于通过细胞-细胞接触依赖性机制抑制应答T细胞的增殖的能力、不能产生IL-2和体外无变应性表型。根据CD25表达水平，可以将人CD4+CD25+T细胞分成抑制性的CD25高和非抑制性的CD25低细胞。已经证实叉头家族的转录因子的一个成员FOXP3在鼠和人CD4+CD25+Treg中表达，且似乎是控制CD4+CD25+Treg发育的主导基因Battaglia,M.等人,“RapamycinpromotesexpansionoffunctionalCD4+CD25+Foxp3+regulatorTcellsofbothhealthysubjectsandtype1diabeticpatients,”J.Immunol.,177:8338-8347200。细胞毒性T淋巴细胞CTL识别来自在靶细胞内产生的蛋白的肽的CD8+T细胞具有细胞毒性的性能，它们导致靶细胞的裂解。CTL诱导的裂解的机制涉及CTL对穿孔蛋白（一种可以插入靶细胞的膜中并促进该细胞的裂解的分子）的生产。由活化的CTL产生的一系列酶（被称作颗粒蛋白酶）会增强穿孔蛋白介导的裂解。许多活跃的CTL也在它们的表面上表达大量fas配体。在CTL的表面上的fas配体与在靶细胞的表面上的fas的相互作用开始所述靶细胞中的细胞凋亡，从而导致这些细胞的死亡。CTL介导的裂解似乎是病毒感染的细胞的破坏的一个主要机制。激发本文中使用的术语“未激发的细胞”也被称作未用过的、原初的或无经历的细胞表示这样的T细胞和B细胞：其已经产生具有特定特异性的抗原受体对于T细胞而言为TCR，对于B细胞而言为BCR，但是尚未遇到所述抗原。本文中使用的术语“激发”表示使T细胞和B细胞前体遇到它们对其特异性的抗原的过程。例如，在辅助性T细胞和B细胞可以相互作用以产生特异性抗体之前，必须激发抗原特异性的T细胞前体。激发包括几个步骤：抗原呈递细胞的抗原摄取、处理和与II类MHC分子结合的抗原的细胞表面表达，淋巴组织中辅助性T细胞前体的再循环和抗原特异性捕获，以及T细胞增殖和分化。Janeway,CA,Jr.,“TheprimingofhelperTcells,Semin.Immunol.11:13-201989。辅助性T细胞表达CD4，但是并非所有的CD4T细胞都是辅助细胞。上文出处。辅助性T细胞的克隆扩增所需的信号不同于其它CD4T细胞所需的信号。对于辅助性T细胞激发而言关键性的抗原呈递细胞似乎是巨噬细胞；且对于辅助性T细胞生长而言的关键性第二信号是巨噬细胞产生的白介素1IL-1。上文出处。如果被激发的T细胞和或B细胞接收到第二共刺激性信号，那么它们变成活化的T细胞或B细胞。本文中使用的术语“移植”表示将细胞、组织或器官从一个部分或个体取出并转移至另一个。根据一个方面，所述的发明提供了结合人Flt3和人CD3的重组双特异性抗体。根据一些实施方案，所述Flt3抗体结合FLT3FLK2受体蛋白。根据一些实施方案，所述FLT3FLK2受体蛋白是哺乳动物蛋白。根据一些实施方案，所述FLT3FLK2受体蛋白是人蛋白。根据一些实施方案，所述FLT3FLK2受体蛋白是天然的。根据一些实施方案，所述FLT3FLK2受体蛋白处于修饰形式。根据一些实施方案，所述FLT3FLK2受体蛋白处于变性形式。根据一些实施方案，所述FLT3FLK2受体蛋白处于未修饰形式。根据一些实施方案，所述Flt3抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段和合成抗体模仿物。根据一些实施方案，所述Flt3抗体是单克隆抗体。根据一些实施方案，所述FLt3单克隆抗体选自合成抗体和经工程改造的抗体。根据一些实施方案，所述合成抗体是重组抗体。根据一些实施方案，所述重组抗体是单链可变片段scFv抗体。根据一些实施方案，所述单链抗体包含与IgG1的CH2结构域连接的Flt3抗体的Fab片段的C末端。根据一些实施方案，所述IgG1的CH2结构域连接至与人CD3的亚基反应的抗体的单链可变片段ScFv。根据一些实施方案，所述单链可变片段是单克隆抗体。根据一些实施方案，所述人CD3的亚基是UCHT1。根据一些实施方案，所述经工程改造的抗体是嵌合抗体。根据一些实施方案，所述经工程改造的抗体是人源化抗体。根据一些实施方案，所述结合Flt3的FLT3抗体有效地阻断FLT3配体与FLT3FLK2受体蛋白的结合。根据一些实施方案，所述结合细胞上的Flt3的FLT3抗体对于所述细胞内化结合的抗体而言是有效的。根据一些实施方案，所述Flt3抗体具有在约1ngmL6.25pM和约2,000ngmL12.5nM之间的半数最大有效浓度EC50。根据一些实施方案，所述Flt3抗体具有在约10ngmL62.5pM和约200ngmL1.25nM之间的半数最大有效浓度EC50。根据一些实施方案，所述结合人Flt3和人CD3的双特异性抗体可有效地消除造血干细胞HPC、早期造血祖细胞HP和癌细胞中的一种或多种。根据一些实施方案，HPC、HP和癌细胞中的一种或多种表达FLT3。根据一些实施方案，有此需要的受试者是适合接受、将接受或正在接受BMHPCPC移植的患者。癌细胞的例子包括、但不限于，急性髓性白血病AML、急性淋巴细胞白血病ALL、慢性髓性白血病BC-CML和慢性淋巴细胞白血病CLL的原始细胞危象阶段的胚细胞。根据一些实施方案，所述双特异性抗体可有效地调理接受骨髓BM造血干细胞HSC移植的患者。根据一些实施方案，所述HSCHP移植用于治疗血液学恶性肿瘤或过度增殖病症，例如，急性髓性白血病AML、急性成淋巴细胞性白血病ALL、慢性淋巴细胞白血病CLL、慢性髓性白血病CML、周围T细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性的遗传性和获得性骨髓病症例如镰刀状细胞贫血、β-重型地中海贫血、顽固性Diamond-Blackfan贫血、骨髓增生异常综合征、特发性重度再生障碍性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范科尼贫血、巨核细胞缺乏或先天性血小板减少症、多发性骨髓瘤或重症联合免疫缺陷SCID。根据另一个方面，一种用于制备结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体的方法包括将Flt3单克隆抗体的Fab片段的C-端连接至IgG1的CH2结构域，和将与人CD3的亚基UCHT1反应的单克隆抗体的单链可变片段ScFv连接至所述IgG1的CH2结构域。根据另一个方面，所述的发明提供了一种在有此需要的患者中消除造血干细胞造血祖细胞HSCHP的方法。根据一些实施方案，所述方法包括给所述患者施用特异性地结合HSCHP和T-细胞的双特异性抗体。具体地，所述双特异性抗体结合由HSCHP表达的人FLT3和由T细胞表达的人CD3。所述抗体的同时结合使T-细胞重新定向特异性地消除患者的HSCHP。所述方法也提供了有效量的特异性抗体向所述患者的施用。有效量是0.01mgkg至10mgkg，更好是0.05mgkg至2mgkg，更好是0.1mgkg至0.5mgkg，更好是0.1mgkg至0.3mgkg，更好是0.1mgkg。根据一些实施方案，所述结合灵长类动物和人CD3的双特异性抗体是人源化抗体。根据一些实施方案，所述双特异性抗体或其抗原结合部分包含FLT3抗体的氨基酸序列。根据一些实施方案，所述双特异性抗体或其抗原结合部分包含CD3抗体的氨基酸序列。根据一些实施方案，所述双特异性抗体或其抗原结合部分包含选自免疫球蛋白GIgG、IgM、IgE、IgA或IgD同种型的同种型。根据另一个方面，本发明还提供了一种在有此需要的患者中消除HSCHP的方法，其中所述HSCHP表达FLT3。所述方法包括选择需要消除HSCHP的患者，和给所述患者施用治疗有效量的包含双特异性抗体的药物组合物，所述双特异性抗体特异性地结合由HSCHP表达的人FLT3和由T-细胞表达的人CD3，其中所述双特异性抗体使T-细胞重新定向杀伤所述患者的HSCHP。需要消除HSCHP的患者是这样的患者：其遭受急性髓性白血病AML、急性成淋巴细胞性白血病ALL、慢性淋巴细胞白血病CLL、慢性髓性白血病CML、周围T细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、non-血液学恶性肿瘤诸如神经母细胞瘤、非恶性的遗传性和获得性骨髓病症例如镰刀状细胞贫血、β-重型地中海贫血、顽固性Diamond-Blackfan贫血、骨髓增生异常综合征、特发性重度再生障碍性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范科尼贫血、巨核细胞缺乏或先天性血小板减少症、多发性骨髓瘤、重症联合免疫缺陷SCID和使用骨髓BM造血干细胞HSC移植治疗的其它病症。所述药物组合物包含所述抗体和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。所述载体选自例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种，以及它们的组合。药学上可接受的载体可以进一步包含小量的辅助物质诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强所述结合蛋白的贮存期限或有效性。如本领域众所周知的，可以配制所述药物组合物，从而在施用后提供活性成分的快速、持续或延迟释放Mishra,M.K.2016.Handbookofencapsulationandcontrolledrelease.BocaRaton,CRCPress,Taylor&FrancisGroup,CRCPressisanimprintoftheTaylor&FrancisGroup,anInformabusiness,通过引用整体并入本文。所述药物组合物可以进一步包含另一种组分诸如T-细胞或抗肿瘤剂。与所述抗体结合施用的抗肿瘤剂包括破坏或损伤肿瘤或恶性细胞的任何药剂。所述抗肿瘤剂选自本领域技术人员已知的合适抗肿瘤剂，且包括蒽环类抗生素例如道诺霉素和多柔比星、耳他汀、甲氨蝶呤MTX、长春地辛、新制癌菌素、顺铂、苯丁酸氮芥、胞嘧啶阿糖胞苷、5-氟尿苷、美法仑、蓖麻蛋白和卡奇霉素，包括联合化学疗法诸如与多柔比星、博来霉素、长春碱和达卡巴嗪ABVD、BEACOPP或增强的BEACOPP博来霉素、依托泊苷、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、丙卡巴肼和泼尼松和StanfordV多柔比星、长春碱、氮芥、长春新碱、博来霉素、依托泊苷和泼尼松一起。所述抗肿瘤剂还可以是免疫疗法例如抗-CD20抗体利妥昔单抗、免疫毒素例如BrentuximabvedotinSGN-35是由与抗微管蛋白剂单甲基耳他汀EMMAE连接的CD-30定向抗体构成的免疫毒素、过继免疫疗法细胞毒性T淋巴细胞、程序性死亡1PD-1阻断例如，nivolumab、pembrolizumab。根据另一个方面，本发明进一步提供了一种在体内动物模型中试验双特异性抗体的方法，所述双特异性抗体使T-细胞重新定向以杀伤HSCHP，其中所述动物模型是具有嵌合的小鼠-人造血系统的免疫受损的人源化小鼠，其中所述人源化小鼠如下建立：向所述骨髓抑制的免疫受损的小鼠中移植人HSCHP或移植人出生后造血内皮细胞。根据在Durben等人MolecularTherapy,第23卷,第4期，2015年4月，通过引用整体并入本文中描述的方法，已经合成了本发明的双特异性抗体。使用的FLT3抗体序列描述在Grosse-Hovest等人的美国专利号9,023,996中，也通过引用整体并入本文。应当理解，尽管结合其优选实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员会意识到，可以做出其它实施方案，而不背离本发明的精神。在提供了值的范围的情况下，应当理解，介于该范围的上限与下限之间的每个居间值直至下限单位的十分之一，除非上下文另外清楚地指明，并且在该所述范围中的任意其它所述值或居间值被包括在本发明内。可以独立地被包括在较小范围中的这些较小范围的上限和下限也被包括在本发明中，具有在所述范围中的任何具体地排除的限制。在所述范围包括一个或两个限值的情况下，排除那些被包括的限值中的任一个或两个限值的范围也被包括在本发明中。除非另外定义，在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料也可以用于实践或试验所述的发明，但是已经描述了示例性的方法和材料。在本文中提及的所有出版物通过引用并入本文以公开和描述引用的出版物与其相关的方法和或材料。必须指出，如在本文中和在所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数所指，除非上下文另外清楚地指明。实施例阐述下述实施例从而给本领域普通技术人员提供如何制备和使用所述的发明的完全公开和描述，它们不旨在限制发明人所以为的发明范围，也不旨在表示下文的实验是所执行的全部或唯一实验。已努力确保关于所用数字例如，量、温度等的准确性，但是应考虑一些实验误差和偏差。除非另外指出，份是重量份，分子量是重量平均分子量，温度是以摄氏度为单位，且压力是处于或接近大气压。为了更好地例证本发明，给出以下实施例。实施例1：抗体合成描述背景信息Fabsc是一种重组双特异性抗体形式。靶向FLT3使用4G8克隆和CD3使用UCHT1抗体序列，也被称作huxCD3v1的双特异性抗体的Fabsc形式如下：Flt3mAb的Fab片段的C-端将连接至IgG1的CH2结构域，继之以UCHT1的ScFv。分别从专利号US9,023,996B2和专利号6,054,297（通过引用整体并入本文）得到4G8克隆和UCHT1的序列。实验的范围基于在背景中描述的形式的4G8和UCHT1可变重链和轻链序列的基因合成。IgG表达载体的分子构建。在HEK293细胞中的0.1升高质量（premium）短暂生产。定制纯化KappaSelect和ProteinL-柱和在pH2.3洗脱。通过SE-HPLC的蛋白聚集分析。目标可交付物（TargetDeliverables）来自0.1升生产的所有纯化的蛋白。研究报告包括：分析证书，CE-SDS分析，SE-HPLC分析报告。取决于在表达和纯化以后得到的收率，客户将决定生产的抗体是否用于以下分析步骤：试验纯度，单体含量，和通过SE-HPLC分析聚集0.1mg。通过ForeBioOctetQKe0.2mg进行使用不同浓度的抗原的结合和解离以及kD的计算。结果将Fabsc抗体克隆进高表达哺乳动物载体系统中，并在HEK293细胞中完成小规模0.1升高质量短暂生产。通过ProteinL纯化来纯化蛋白，并得到20.17mg蛋白。报告收率，且客户证实应当执行SE-HPLC。通过SE-HPLC确定所述抗体是92%未聚集的单体。载体构建和短暂生产表达载体的分子构建合成DNAStudio基因并将程序化的序列克隆进高表达哺乳动物载体之一中。将完成的构建体进行序列验证，然后进行转染。表A小规模瞬时转染在转染前1天将HEK293细胞接种在摇瓶中，并使用无血清化学成分确定的培养基培养。使用瞬时转染的标准操作程序，将DNA表达构建体瞬时转染进0.1升的HEK293细胞悬浮液中。20小时以后，将细胞取样以得到生存力和活细胞计数，并测量滴度OctetQKe,ForteBio。在第5天收获培养物，并做另外的读出。ProteinL亲和纯化将Fabsc的条件培养基收获，并通过离心和过滤从瞬时转染生产批次澄清。将上清液上ProteinL柱并用低pH缓冲液洗脱。在等分之前使用0.2µm膜滤器执行过滤。纯化和过滤以后，从OD280和消光系数计算蛋白浓度。关于收率和等分试样的概述，参见表1。执行CE-SDS分析LabChipGXII,PerkinElmer并绘制电泳图谱和显示在图1A和B中。SE-HPLC分析以0.2mLmin的流速将5µL纯化的抗体注射进MAbPacSEC-1,5µm,4x300mm柱中25分钟。在预期的时间以92%洗脱蛋白，呈它的非聚集形式。可以在图1C中看到SE-HPLC的色谱图和说明。关于聚集水平的概述，参见表1。表1.最终的收率和等分试样。项目概述将Fabsc抗体克隆进LakePharma的高表达哺乳动物载体系统中，并在HEK293细胞中完成小规模0.1升高质量短暂生产。通过ProteinL纯化来纯化蛋白，并得到20.17mg蛋白，并递送19.07mg。通过SE-HPLC确定所述抗体是92%未聚集的。关于收率和等分试样的概述，参见表1。蛋白纯化结果过程概述和说明ProteinL亲和色谱法0.2μm无菌过滤。表2蛋白名称Fabsc批号4622-848799消光系数用于浓度计算1.67mgml-1cm-1蛋白浓度5.45mgml体积0.50ml总蛋白2.72mg内毒素未测量物理状态液体缓冲液230mMHEPES,115mMNaCl,58mMnaOAc,pH7.0表3试验SE-HPLCSR#3916样品IDFabscPP4622日期2015-12-09科学家SW表4.方法峰编号时间min峰大小kDa峰面积%峰ID111.2~2305.8聚集体212.7~10091.8单体313.9~402.4片段456表5柱MabPacSEC-1,5µm,4x300mm流动相50mM磷酸钠,300mMNaCl,pH6.2等度0-25min流速mLmin0.2注射体积µL5实施例2：用于骨髓造血干细胞BMHSC移植的患者的准备或调理.用于骨髓造血干细胞BMHSC移植的患者的准备或调理是所述程序的一个至关重要的要素。它有两个主要目的：1它提供患者的适当免疫抑制并在骨髓中为移植的HSC清除足够生态位空间，这允许将移植的细胞移入接受者中；和2它经常帮助根除恶性肿瘤的来源。传统上已经如下实现患者的调理：在有或没有辐射下施用最大耐受剂量的化疗剂的混合物。经常将混合物的组分选择成具有不重叠的毒性。目前在使用中的所有准备方案是有毒的，且具有可以危及生命的严重副作用。这些副作用包括粘膜炎、恶心和呕吐、脱发、腹泻、疹、周围神经病、不育、肺毒性和肝毒性。这些副作用中的许多对于老年和患病的患者而言是特别危险的，且经常在决定患者是否将接受移植时变成决定性组分。为了消除化学治疗剂用于调理接受BMHSC移植的患者的应用，我们开发了使用重新定向的T-细胞杀伤选择性地消除造血干细胞造血祖细胞HSCHP的方法。该方法是基于双特异性抗体的应用，所述双特异性抗体结合HSCHP的表面上的靶标FLT3，并且也结合T-细胞的表面上的靶标CD3，从而募集针对HSCHP的T-细胞。作为开发的方法可用于消除HSCHP的原理的证据，我们试验了双特异性的FLT3xCD3抗体，其被设计成杀伤急性髓性白血病AML患者的原代外周血单核细胞中的白血病胚细胞Durben,Schmiedel等人.2015。将雌性免疫受损的NOGNOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1SugJicTac小鼠4-6周龄用于从脐带血CB移植人CD34+HSCHP。使用Ficoll-PaqueGEHealthcareLifeSciences通过梯度密度离心分离CB的单核细胞级分。简而言之，将用抗凝剂处理过的CB与磷酸盐缓冲盐水PBS以1:1比例混合，并覆盖35ml混合物在50ml圆锥形离心管内的Ficoll-Paque层10ml上。然后将试管在400xg的速度离心。小心地取出单核细胞淋巴细胞层，并将从该层得到的细胞用PBS洗涤2次。用血小板消耗StemcellTechnologies通过阴性选择来分离CD34+HSCHP。靶向不希望的细胞，用于用识别CD2、CD3、CD11b、CD11c、CD14、CD16、CD19、CD24、CD56、CD61、CD66b、血型糖蛋白A和葡聚糖包被的磁性颗粒的四聚体抗体复合物除去。在不使用柱的情况下使用EasySep™磁体将标记的细胞分离。将CD34+HSCHP以10,000-50,000个细胞200µl重新悬浮于PBS中用于移植进骨髓抑制的NOG小鼠。在移植前24小时，经由腹膜内注射使用白消安10mgkg将小鼠骨髓抑制。通过尾静脉注射200µl细胞悬浮液n=52，移植CD34+HSCHP。移植后十八18周，针对人CD45+细胞的存在试验移植的小鼠的外周血。选择具有≥40%人CD45+细胞的百分比≥总CD45+细胞的40%的嵌合性水平的小鼠用于进一步实验n=27；图1A,B。在外周血中试验嵌合性水平并如下计算：。还针对人B-细胞hCD19+、人T-细胞hCD3+和属于髓样谱系的人细胞hCD33+的存在试验了选择的小鼠的外周血。大多数小鼠表现出所有三个谱系的稳健发育图1A,B。一些小鼠n=3是CD3+细胞发育缺陷的图1B星号,D。将这些T-细胞缺陷的小鼠用作实验内的内部对照组。插入物的蛋白序列信号肽可变重链可变轻链。插入物的DNA序列实施例3：涉及针对Flt3FLK2人受体蛋白的单克隆抗体的产生和表征用表达人FT3FLK2受体蛋白的完全编码序列和嘌呤霉素抗性的选择标志物的慢病毒转导来自鼠骨髓瘤细胞系SP20的细胞。在体外在有嘌呤霉素存在下选择转导的细胞。将经过选择并针对人FLT3FLK2蛋白细胞SP20-Hu-FLT3的表达验证过的细胞用作抗原。将8周龄Balbc小鼠通过每5天腹膜内注射用107SP20-Hu-FLT3细胞免疫3次，以便产生对FLT3FLK2蛋白特异性的抗体。通过使用流式细胞计量术针对FLT3FLK2抗原的结合筛选免疫的小鼠的血清，试验抗体的发展。第一次免疫接种以后大约3周，收集免疫的小鼠的脾，并用于分离脾细胞。将分离的脾细胞与SP20细胞融合，并针对杂交表型杂交瘤进行选择。将杂交瘤在体外培养，并通过流式细胞计量术针对抗-FLT3FLK2抗体的存在筛选来自杂交瘤培养物的上清液图3。9个杂交瘤克隆表现出抗-FLT3FLK2抗体的生产。扩增这些杂交瘤克隆用于分离单克隆抗体。将分离的单克隆抗-FLT3FLK2抗体纯化并针对它们的选择性进行试验图4。实施例4：单克隆抗体对人FLT3FLK2受体蛋白的特异性的表征通过评价它们对FLT3FLK2抗原的亲和力，确定单克隆抗体的特异性。为了确定抗-人FLT3FLK2抗体的亲和力，使用流式细胞计量术构建有效浓度EC曲线。将9个单克隆抗体克隆用于染色内源性地表达人FLT3FLK2的人REH细胞。所述克隆的浓度范围为1ngml6.25pM至10,000ngml62.5nM。选择5个具有在从约70ngml437.5pM至1566ngml9.79nM的范围内的EC50的克隆图5用于测序。克隆的测序揭示，克隆1-23DA和1-18具有相同的氨基酸序列。在下面显示了克隆的序列。MHC1692-1-23DA序列：FASTA格式的氨基酸序列MHC1692LC.2\;M13F-轻链SEQIDNO:5FASTA格式的核苷酸序列MHC1692LC.2\;M13F-轻链SEQIDNO:6FASTA格式的氨基酸序列MHC1692HC.1\;M13F-重链SEQIDNO:7FASTA格式的核苷酸序列MHC1692HC.1\;M13F-重链SEQIDNO:8MHC1693-3-16HA序列：FASTA格式的氨基酸序列MHC1693LC.1\;M13F-轻链SEQIDNO:9FASTA格式的核苷酸序列MHC1693LC.1\;M13F-轻链SEQIDNO:10FASTA格式的氨基酸序列MHC1693HC.3\;M13F-重链SEQIDNO:11FASTA格式的核苷酸序列MHC1693HC.3\;M13F-重链SEQIDNO:12MHC1695-3-3OA序列：FASTA格式的氨基酸序列MHC1695LC.8\;M13F-轻链SEQIDNO:13FASTA格式的核苷酸序列MHC1695LC.8\;M13F-轻链SEQIDNO:14FASTA格式的氨基酸序列MHC1695HC.3\;M13F-重链SEQIDNO:15FASTA格式的核苷酸序列MHC1695HC.3\;M13F-重链SEQIDNO:16MHC1696-2-8IA序列：FASTA格式的氨基酸序列MHC1696LC.3\;M13F-轻链SEQIDNO:17FASTA格式的核苷酸序列MHC1696LC.3\;M13F-轻链SEQIDNO:18FASTA格式的氨基酸序列MHC1696HC.2\;M13F-重链SEQIDNO:19FASTA格式的核苷酸序列MHC1696HC.2\;M13F-重链SEQIDNO:20实施例5：针对人FLT3FLK2受体蛋白的单克隆抗体的内化的表征通过内化测定来定量针对FLT3FLK2的单克隆抗体的内化实施例3。简而言之，针对抗体281A、330A、316HA和123DA，在染色缓冲液（含有2%小牛血清（BCS）的1x磷酸盐缓冲盐水（PBS））中在冰上制备抗体的2X4µgml工作储备液。将4µgml的抗-人CD135FLT3FLK2抗体的储备液BioLegend#313302,克隆BV10A4H2和4µgml同种型对照BioLegend#400102,克隆MOPC-21分别制备为阳性和阴性CD135染色对照。将Reh细胞（表达CD135的人细胞系）洗涤，并以2x106个细胞ml的浓度重新悬浮于染色缓冲液中。将一级抗体以1:1加给等体积的细胞，达到2µgml的终浓度。将细胞在容易洗涤的15mL离心管中染色。接着，将细胞在冰上温育30分钟，然后在5mlPBS中洗涤3次以除去未结合的一级抗体。将染色的细胞重新悬浮于完全培养基含有谷氨酰胺和2%BCS的RPMI1640，并以100µl孔分入平行的96孔板中，将单独平板用于每个时间点一式三份孔。将一组平板转移至37℃培养箱,5%CO2，并将第二组平板保持在4℃。温育时间是10分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时和4小时。在温育后，将平板在1xPBS中洗涤。然后将细胞在冰上在暗处用抗-小鼠IgGAlexa488二级抗体JacksonImmuno#115545164以1:800稀释度染色30分钟。还制备了含有未染色的细胞和只用二级抗体染色的细胞的一式三份对照孔。与二级抗体一起温育以后，将细胞在含有2%BCS的1xPBS中洗涤最后一次，并在即将FACS之前用7AAD染色。以60µl分钟的样品流速，在BeckmanCoulterCytoflex上通过流式细胞计量术分析染色的细胞。为每个孔捕获10,000个事件，并使用FloJo软件第10版评价FCS文件。针对活细胞群体计算Alexa488的平均荧光强度MFI，并在4℃和37℃相对于时间绘制每种抗体的MFI变化。如在图6中所示，所有克隆表现出内化，其中克隆330A和123DA表现出最快速的内化图6。不受理论的限制，假定抗-FLT3FLK2抗体克隆330A、123DA、316HA和281A的内化性质使得它们有效地成为媒介物例如，抗体-药物-缀合物-ADC以将药物毒素递送到靶细胞内。尽管已经参考其具体实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员应当理解，可以做出多种变化且可以替换等同物，而不脱离本发明的真实精神和范围。另外，可以做出许多修改来使特定情形、材料、物质的组合物、方法、一个或多个方法步骤适应本发明的客观精神和范围。所有这样的改进意图在本文所附的权利要求的范围内。

权利要求：1.一种为造血细胞移植准备或调理有此需要的患者的方法，所述方法包括：提供结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体，和给所述患者施用治疗量的包含所述双特异性抗体的药物组合物；其中所述治疗量有效地：使外周血中表达CD45、CD3、FLT3、CD19、CD33中的一种或多种的细胞群体的水平减小至少90%，和减小用于准备或调理所述患者的方案的毒性。2.根据权利要求1所述的方法，其中结合FLT3的双特异性抗体的抗原结合部分的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:1，且结合FLT3的双特异性抗体的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:2。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述双特异性抗体包含与人CD3的亚基反应的单克隆抗体。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述双特异性抗体或其抗原结合部分包含选自免疫球蛋白GIgG、IgM、IgE、IgA和IgD同种型的同种型。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述有效量包含0.01mgkg至10mgkg，更好是0.05mgkg至2mgkg，更好是0.1mgkg至0.5mgkg，更好是0.1mgkg至0.3mgkg，更好是0.1mgkg。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述有此需要的患者遭受急性髓性白血病AML、急性成淋巴细胞性白血病ALL、慢性髓性白血病CLL、CML、周围T细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性的遗传性和获得性骨髓病症、多发性骨髓瘤或SCID。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述非恶性的遗传性和获得性骨髓病症选自镰刀状细胞贫血、β-重型地中海贫血、顽固性Diamond-Blackfan贫血、骨髓增生异常综合征、特发性重度再生障碍性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范科尼贫血、巨核细胞缺乏和先天性的血小板减少症。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物进一步包含抗肿瘤剂。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述双特异性抗体是人源化抗体。10.一种用于制备结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体的方法，所述方法包括：将Flt3单克隆抗体的Fab抗原结合片段的C-端连接至IgG1的CH2结构域，和将与人CD3的亚基UCHT1反应的单克隆抗体的单链可变片段ScFv连接至所述IgG1的CH2结构域。11.一种结合人FLT3和人CD3的重组单链双特异性抗体，其包含：与IgG1的CH2结构域连接的Flt3单克隆抗体的Fab抗原结合片段的C-端，和与所述IgG1的CH2结构域连接的、与人CD3的亚基UCHT1反应的单克隆抗体的单链可变片段ScFv。12.根据权利要求11所述的重组单链双特异性抗体，其中Fab抗原结合片段的重链结合结构域的氨基酸序列是SEQIDNO:1H3113，且Fab抗原结合片段的轻链结合结构域的氨基酸序列是SEQIDNO:2L3133。13.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:5，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:7。14.根据权利要求13所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在1ngmL6.25pM和2,000ngmL12.5nM之间。15.根据权利要求14所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在10ngmL62.5pM和200ngmL1.25nM之间。16.根据权利要求13所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合细胞上的人FLT3FLK2受体蛋白的FLT3抗体对于所述细胞内化结合的抗体或抗原结合片段而言是有效的。17.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:9，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:11。18.根据权利要求17所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的半数最大有效浓度EC50是在1ngmL6.25pM和2,000ngmL12.5nM之间。19.根据权利要求18所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在10ngmL62.5pM和200ngmL1.25nM之间。20.根据权利要求17所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合细胞上的人FLT3FLK2受体蛋白的FLT3抗体对于所述细胞内化结合的抗体或抗原结合片段而言是有效的。21.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:13，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:15。22.根据权利要求21所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在1ngmL6.25pM和2,000ngmL12.5nM之间。23.根据权利要求22所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在10ngmL62.5pM和200ngmL1.25nM之间。24.根据权利要求21所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合细胞上的人FLT3FLK2受体蛋白的FLT3抗体对于所述细胞内化结合的抗体或抗原结合片段而言是有效的。25.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的轻链的氨基酸序列是SEQIDNO:17，且结合人FLT3FLK2受体蛋白的抗体或其片段的抗原结合部分的的重链的氨基酸序列是SEQIDNO:19。26.根据权利要求25所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在1ngmL6.25pM和2,000ngmL12.5nM之间。27.根据权利要求26所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的半数最大有效浓度EC50是在10ngmL62.5pM和200ngmL1.25nM之间。28.根据权利要求25所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中结合细胞上的人FLT3FLK2受体蛋白的FLT3抗体对于所述细胞内化结合的抗体或抗原结合片段而言是有效的。

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