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申请/专利权人：中国药科大学

摘要：本发明公开了一种线粒体基因治疗载体MI‑linker‑U‑binding的制备方法及其运用。本发明属于药物制剂技术领域。本发明通过线粒体靶向基团和氟化材料膜穿透能力进入线粒体基质，并响应于病变线粒体高ROS的水平释放功能基因和治疗药物Ide，达到对于线粒体基因突变相关疾病如：LHON标本兼治的目的；另外本发明避免了目前病毒载体介导的异位表达体系效率低、免疫原性高、价格昂贵等问题，该载体能够高效递送功能基因和药物进入线粒体基质，实现对LHON标本兼治的效果；该线粒体基因治疗载体也可用于其他线粒体基因突变所引起的疾病，如线粒体脑肌病伴乳酸酸中毒及卒中样发作综合征MELAS、肌阵挛性癫痫和不规整红纤维病MERRF等。

主权项：1.一种线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding的制备方法：其特征在于：所述线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding由M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding以50：1摩尔比混合形成；所述M-linker-U-binding与Ide-linker-U-binding的化学结构如下： 其中，m、n为正整数，所述MI-linker-U-binding、M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding中M表示线粒体靶向基团，I和Ide表示药物艾地苯醌，linker表示活性氧响应键，U表示十一氟己胺，binding表示基因结合基团；M-linker-U-binding表示带有线粒体靶向基团的氟化活性氧响应载体，Ide-linker-U-binding表示带有艾地苯醌的氟化活性氧响应载体，MI-linker-U-binding表示同时带有线粒体靶向基团和艾地苯醌的氟化活性氧响应载体；其具体包括以下步骤：1、所述linker-U-binding的合成：将活性氧响应键、十一氟己胺和基因结合基团以1.2：0.2：0.8的摩尔比溶于无水二甲基亚砜中，在90℃油浴条件下反应48h得到双键末端的linker-U-binding；随后，取出二分之一体积的linker-U-binding搁置，在剩下二分之一体积的中linker-U-binding加入37μL封端分子，40℃反应24h，最后通过乙醚沉淀得到氨基末端的linker-U-binding；2、M-linker-U-binding的合成：将活化后的线粒体靶向基团与氨基末端的linker-U-binding混合搅拌，在25℃-35℃的温度中反应24h，后得到M-linker-U-binding；3、Ide-linker-U-binding的合成：在搁置的linker-U-binding中加入5倍摩尔量的艾地苯醌；在40℃条件下反应24h得到Ide-linker-U-binding；4、MI-linker-U-binding的制备：将合成得到的M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding采用乙醚沉淀；祛除杂质收集得到固体的M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding，利用无水二甲基亚砜分别配制浓度为200mgmL的母液，用pH＝4.5的碳酸氢钠缓冲溶液对母液进行稀释，将二者以50：1摩尔比混合，制备得到载体MI-linker-U-binding；所述线粒体靶向基团选自三苯基膦；所述基因结合基团选自组胺、胍丁胺和精氨酸中的一种或多种；所述活性氧响应键选自缩硫酮、硫醚酯键和双硒键中的一种或多种。

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