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申请/专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所

摘要：本发明属于生物育种技术领域，尤其涉及基于PIT标记的龟类产卵量及受精率的定量方法及应用。本发明使用PIT标记经由背甲和腹甲之间容纳后肢的间隙部位注射进入腹腔，以实现对龟类的标记。运用挂签法，即将上述的PIT编号用记号笔登记在制作好的圆形纸质标签上，并用尼龙绳系在竹签末端，在龟类产卵结束，即将完成卵的掩埋工作时，将竹签插在雌龟产卵点旁，次日早晨收集龟卵。将PIT标记和挂签法相结合，即可解决个体产卵量和受精率不明的难题。

主权项：1.基于PIT标记的龟类产卵量及受精率的定量方法，其特征在于，包括以下步骤：利用PIT电子标签对雌龟进行标记：在繁殖期前，利用PIT电子标签对雌龟进行标记；所述雌龟为黄喉拟水龟；在利用PIT电子标签对雌龟进行标记步骤中，在繁殖期前，天气晴朗，温度适宜的情况下，将PIT电子标签沿着雌龟背甲和腹甲之间容纳后肢的间隙部位注射进入雌龟腹腔；注射前用高锰酸钾对电子标签进行消毒，接着用75%酒精棉球对入针处的腹膜进行消毒，注射时针管和腹甲与背甲连接处外沿角度≤30度，入针深度2.5-3cm；注射完成后，用棉签蘸取红霉素软膏对入针处均匀涂抹，以防止伤口发炎；最后用手持式扫码机读取电子标签号，验证并登记标签编号；标记后的雌龟，隔日后放入产卵水池；登记产卵个体编号，标记筑巢点：在雌龟产卵即将完成时，利用手持式扫码机从雌龟后部读取筑巢个体的电子标签编号，将编号用记号笔登记在制作好的圆形纸质标签上，并用尼龙绳系在竹签末端，插在雌龟产卵点旁；在登记产卵个体编号，标记筑巢点步骤中，在养殖条件下，整个产卵池分为两部分：产卵场地和活动场地；产卵场地略高于活动场地，两者之间用挡板隔开；产卵期间，在每天17点-22点之间，移开挡板，每隔半小时巡查雌龟筑巢情况；在雌龟产卵即将完成时，即用后肢掘取沙子掩盖卵期间，利用手持式扫码机从雌龟后部轻轻贴近背甲近尾端处，读取筑巢个体的电子标签编号；将编号用记号笔登记在制作好的圆形纸质标签上，并用尼龙绳系在竹签末端，插在雌龟产卵点旁，以便次日早晨收集龟卵；龟卵收集及编号：用铅笔对收集到的龟卵进行编号，随后在卵的上面铺设一层沙子，放在聚乙烯盆中，待后续检查受精情况；在龟卵收集及编号步骤中，用毛刷清除卵表面的沙子，用铅笔按照“标签号”+“产卵日期”+“卵称重顺序”的格式对收集到的龟卵进行编号；在卵的中上部和中下部对编号进行两次记录，随后用电子天平按顺序记录卵的重量；随后在卵的上面铺设一层沙子，放在聚乙烯盆中，待后续检查受精情况；统计受精率和产卵量：卵收集后48-72小时，轻轻拨开沙子，记录卵的受精情况；受精卵的标志是：在卵的中央周围出现一个白色的受精斑，且随着时间推移，白色受精斑逐渐环绕整个龟卵；否则，则定为非受精卵；待繁殖期结束后，统计整个繁殖期黄喉拟水龟卵的受精率和产卵量。

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