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申请/专利权人：路春光

摘要：本发明涉及免疫细胞靶向治疗实体瘤技术领域，特别涉及一种改良肿瘤浸润T淋巴细胞（TIL）诱导分化为TCM和TSCM细胞及应用。TIL为聚集在肿瘤病灶区域内的CD8+T淋巴细胞，在肿瘤免疫机制中处于免疫应答和调控作用的前沿，为攻克实体瘤带来一线曙光，但从肿瘤组织分离培养肿瘤局部浸润性CD8+T淋巴细胞很困难，而且TIL大多处于耗竭状态，很难扩增。为了解决从肿瘤组织分离制备TIL得率低，增殖活性低的问题，本人通过将肿瘤组织块和低温冻存的PBMC或新鲜分离的PBMC共培养的方法，获得改良TIL细胞，将其诱导成TIL‑TCM或TIL‑TSCM细胞，有望提供具有更强生存能力和效应功能的肿瘤反应性T细胞。

主权项：1.一种临床用改良TIL-TCM和TIL-TSCM诱导培养和质量控制鉴定的方法，其特征在于，包含从新鲜或低温冻存的人体外周血单个核细胞中分离纯化T细胞，T细胞和肿瘤组织块共培养，获得改良TIL，用本人发明的TCM诱导试剂盒和TSCM诱导试剂盒将TIL诱导扩增为TIL-TCM和TIL-TSCM的方法及应用：（1）从外周血中分离PBMC或复苏低温冻存的PBMC细胞，并用CD3磁珠分选纯化出CD3阳性的T细胞，将大小1-5mm3的肿瘤组织块和T细胞共培养；（2）TIL-TCM诱导：D0天用TCM-II，包被六孔板或培养瓶，平放于37℃培养箱中大于2小时，上述（1）中T细胞按照密度1×106mL用TCM-III重悬，其中添加300-2000umL人干扰素γ、50-200ngmLCD3单抗、50-200ngmLCD28单抗、50-200umL人白介素1α、30IUmL人白介素7、30IUmL人白介素15、500-2000umLIL-2，第二天以后用TCM-I培养液对TIL-TCM细胞进行扩增培养，经过8-10天的扩增培养，收获达到临床应用标准的TIL-TCM细胞，并对细胞制剂进行内毒素、活性和表型检测，细胞鉴定结果表明，细胞活性达到95%以上，同时含有较高比例的CD8+CD62L+CD45RO+和CD4+CD62L+CD45RO+细胞；（3）TIL-TSCM诱导：D0天用TSCM-II包被六孔板或培养瓶，平放于37℃培养箱中大于2小时，上述（1）中T按照细胞密度1×106mL用TSCM-III重悬，其中添加50-200ngmLCD3单抗、50-200ngmLCD28单抗、5-30ngmL人白介素7、5-30ngmL人白介素21，5-30ngmL人白介素15，第二天以后用TSCM-I培养液对TIL-TSCM细胞进行扩增培养，经过15-30天的扩增培养，收获达到临床应用标准的TIL-TSCM细胞，并对细胞制剂进行内毒素、活性和表型检测，细胞鉴定结果表明，细胞活性达到95%以上，同时含有较高比例的CD3+-BV421CD4+-APC-CyCD8+APCCD62L+PE-cy7CD45RO-Percp-Cy5.5CD45RA+FITCCD95+PE细胞；（4）TIL-TCM和TIL-TSCM诱导培养后鉴定：用本人发明的TCM和TSCM鉴定试剂盒进行鉴定。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 路春光 改良TIL细胞诱导的TCM/TSCM细胞及应用