买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：广州药本君安医药科技股份有限公司

摘要：本发明公开了一种具有抗肿瘤作用的DMXAA‑Pyranoxanthone杂合体化合物及其制备方法与用途。该化合物的结构如式I所示。其制备方法包括：三个步骤制备DMXAA，两个步骤制备pyranoxanthone，两个步骤将DMXAA和pyranoxanthone骈合为DMXAA‑Pyranoxanthone杂合体化合物。本发明所述DMXAA‑Pyranoxanthone杂合体化合物以及DMXAApyranoxanthone联合药物对乳腺癌、肝癌、白血病细胞具有优良的体外肿瘤细胞增殖抑制活性，并且能多靶点诱导肿瘤细胞的凋亡。本发明所述DMXAA‑Pyranoxanthone杂合体化合物以及DMXAApyranoxanthone联合药物可以应用于制备治疗癌症药物。

主权项：1.一种具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物，其特征在于，结构如式I所示： 式I中，X＝O；n＝3,4,5,6；Y＝O。

全文数据：一种DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物及其制备方法与用途技术领域[0001]本发明属于药物领域，具体涉及一种具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物及其制备方法，以及该杂合体化合物在制备抗肿瘤药物中的应用背景技术[0002]众所周知，癌症已经成为当今威胁人类健康的高发疾病之一。在许多国家，肿瘤的发病率不断增加，已经成为第一致死性疾病。目前，针对肿瘤的治疗已经有许多方法，其中有不少具有一定的效果，但通常会带来严重的系统毒性、癌症的转移和复发，距离癌症的根治仍具有一定的距离。因而，研发高效、安全、低毒性的癌症治疗药物已成为当今药物研究的热点和难点。[0003]咕吨酮类化合物xanthones是一类具有广泛药理活性的杂环化合物，据文献报道，此类化合物具有抗癌、抗疟、抗HIV、抗惊厥等作用，可抑制胆碱酯酶、α-糖苷酶、拓扑异构酶、蛋白激酶及各种芳香酶的活性，同时具有较好的抗氧化作用。因此，xanthones在新药的设计、开发上经常被作为重要的药核骨架。[0004]5,6_二甲基咕吨酮-2-乙酸DMXAA，由新西兰奥克兰大学肿瘤研究中心研制开发的一个抗肿瘤化合物，已经进入临床III期（Rehman，F.;Rustin，G.Exp.Opin.Inv.Drugs2008,17,1547-1551。但DMXAA的抗肿瘤细胞增殖活性并非特别活泼，临床所使用的剂量大，达到4.9gm2Li，J.;Jameson，M.B.;Baguley，B.C.;Pili，R.;Baker，S.D.Clin.CancerRes.2008,14,2102-2110，由此导致DMXAA在临床应用时具有一定的心脏毒性、视觉障碍、尿失禁和引起病人的焦虑感和躁动不安Zhou,S.F.;Kestell,P·;Baguley，B.C.!Paxton,J.W.Invest.NewDrugs2002,20,281-295。因此，解决该抗肿瘤药物的毒副作用，提高该抗肿瘤药物的抗癌活性及疗效、降低毒副作用是业界亟待解决的技术问题。发明内容[0005]有鉴于此，本发明的首要目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物简称D-P-n杂合体化合物），提高DMXAA的抗肿瘤活性及降低其毒副作用。[0006]本发明的另一目的在于提供上述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物的制备方法，基于药物拼接原理，利用pyranoxanthone与DMXAA构建DMXAA-pyranoxanthoneD-P-n杂合体化合物。[0007]本发明的再一目的在于揭示D-P-n杂合体化合物的多靶标导向抗肿瘤特性，从而公开了D-P-n杂合体化合物在制备癌症治疗药物中的应用，尤其是其在制备治疗肝癌药物和乳腺癌药物中的应用。[0008]本发明的目的通过下述技术方案实现：[0009]—方面，本发明提供了具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物，其结构如式I所示：[0011]式I中，X=0，N;n=2,3,4,5,6,7,8;Y=0，N。[0012]优选地，式Jmj=O5ll=SdJj5Y=Ot3[0013]另一方面，本发明提供了上述方案公开的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物的制备方法，其合成包含以下七个步骤：[0014]Sl.将3,4-二甲基苯甲酸溶于浓硫酸，分批加入N-溴代琥珀酰亚胺⑽S反应8〜14h，后处理得2，5-二溴-3，4-二甲基苯甲酸；[0015]S2.将无水氯化锌溶于三氯氧磷，然后加入2，5-二溴-3，4-二甲基苯甲酸与邻羟基苯乙酸，反应温度60〜90°C，加热搅拌30〜60min，反应结束后分离纯化得2-7-溴-5，6-二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸；[0016]S3.将化合物2-7-溴-5,6-二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸溶于适量溶剂，经H2PdC还原，分离纯化得5，6-二甲基咕吨酮-2-乙酸DMXAA;[0017]S4.将无水氯化锌溶于三氯氧磷，然后加入水杨酸及联苯三酚，反应温度50〜95°C，加热搅拌30〜60min，反应结束后分离纯化得3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮；[0018]S5.将3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮与1-溴-3-甲基-2-丁烯及蒙脱土KlO在微波加热条件下反应，反应结束后分离纯化得卩比喃咕吨酮pyranoxanthone;[0019]S6.将吡喃咕吨酮溶于碱中，滴加溶于有机溶剂中的η-溴取代醇反应，在10〜40°C反应20〜30h，结束后分离纯化得4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮；[0020]S7.将4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮及DMXAA溶于适量有机溶剂，加入缩合剂和催化剂，反应温度10〜40°C，反应时间15〜30h，分离纯化后得D-P-n杂合体化合物。[0021]作为本发明的优选方案，本发明的制备方法中还包含如下附加技术特征的部分或者全部：[0022]Sl中3，4-二甲基苯甲酸与NBS的投料比为1.0:1.0〜5.0;[0023]S2中2,5_二溴-3,4-二甲基苯甲酸与邻羟基苯乙酸的投料比为1.0:1.0〜5.0;所用三氯氧磷与无水氯化锌的混合比例同S4;[0024]S3中的溶剂为甲醇、乙醇和DCM中的一种，优选甲醇；所用氢气压力为1.0〜1.5atm；[0025]S4中所述的取代水杨酸与间苯三酚的投料摩尔比为1.0:1.0〜3.0;三氯氧磷与无水氯化锌的投料重量比为5.0〜10.0:1.0;加热方式为微波加热和油浴加热中的一种，优选微波加热；[0026]S5中3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮与1-溴-3-甲基-2-丁烯的投料比为1.0:1.0〜3.0;3,4_二轻基-9H-氧杂蒽_9_酬与蒙脱土KlO的投料比为1.0:1.0〜3.0;[0027]S6中吡喃咕吨酮与η-溴取代醇的投料比为1.0:1.0〜3.0;所用碱可以为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的任何一种；所用有机溶剂可以为Ν，Ν-二甲基甲酰胺DMF、二氯甲烷DCM和四氢呋喃THF中的一种，优选DMF;[0028]S7中4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮、DMXAA和缩合剂的投料摩尔比为1.0:1.0〜3.0:1.0〜3.0;所用缩合剂为N，N-二环己基碳二亚胺DCC、N，N-二异丙基基碳二亚胺DIC和1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐EDC·HC1中的任何一种;所用催化剂为4-二甲氨基吡啶DMP，DMAP的加入量为摩尔投料量的5〜10%。[0029]简而言之，所述的D-P-n杂合体化合物为DMXAA与Pyranoxanthone通过不同长度碳链连接而成的一体化化合物。以水杨酸和焦酸为原料制备卩比喃咕吨酮pyranoxanthone;以3，4-二甲基苯甲酸和邻轻基苯乙酸为原料制备DMXAA;然后DMXAA与Pyranoxanthone通过不同长度的碳链进行连接得一种D-P-n杂合体化合物。其合成路线如下所示：[0031]反应条件和试剂:aZnCl2P〇Cl3，微波照射mwr，40min;bBrCH2CHCCH32，mwr600W，蒙脱土KlO20equiV·，CHCl3，40min;cBrOfen0H，逐滴滴加，30min，K2CO3，DMF，室温，24h;dNBS,H2SO4，16h;e2-羟基苯乙酸，ZnCl2P〇Cl3mwr，40min;fH2，PdC;gDCCDMAP.[0032]再一方面，本发明还提供上述具有抗肿瘤作用的D-P-n杂合体化合物在制备多靶点癌症治疗药物中的应用，尤其是制备治疗肝癌、乳腺癌和白血病药物药物中的应用。[0033]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：（1本发明所公开的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物能显著降低正常细胞的毒性；（2本发明公开的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物能显著抑制肝癌和乳腺癌细胞株的体外增殖；（3本发明公开的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物具有多革El标抗肿瘤特性；⑷本发明公开的D-P-n杂合体化合物合成方法具有反应迅速、步骤简单、收率高、产品纯度高、经济适用的特点。附图说明[0034]图1化合物P-D-6的IHNMR图谱。[0035]图2化合物P-D-6的13CNMR图谱。[0036]图3DMXAAD、Pyranoxanthone⑻、P+D联合用药、P-D-6对细胞的周期分布的影响。[0037]图4流式检测DMXAA、Pyranoxanthone、P+D、P-D-6诱导细胞凋亡。[0038]图5DMXAA、Pyranoxanthone、P+D联合用药、P-D-6作用HepG2细胞后线粒体膜电位变化的流式分析。[0039]图6Pyranoxanthone、P+D联合用药、P-D-6作用于HepG2细胞凋亡相关蛋白含量。具体实施方式[0040]下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。[0041]实施例1[0042]D-P杂合体化合物的制备。[0043]1.1D-P-3杂合体化合物的制备[0044]包括以下7个步骤：[0045]1.1.12,5_二溴-3,4-二甲基苯甲酸的制备[0046]取3，4-二甲基苯甲酸（0.164g，I.Ommo1溶于20mL浓硫酸中，分批加入NBS0.212g，1.2mmol，室温搅拌反应12h;随后缓慢将反应混合物倒入冰水溶液中，有白色沉淀，滤集沉淀，用冷水洗涤;粗产品用蒸馏水重结晶纯化，得白色晶体0.303g，收率98.0%，NMR75MHz，CDC13δ:177.1,136.5,135.4,135.1,133.7,127.0,123.3,19.3,18.9;ESI-MSmz:307.9[M+H]+。以上数据证实该化合物为2，5-二溴-3，4-二甲基苯甲酸。[0047]22-7-溴-5,6_二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸的制备[0048]量取POCl315mL和无水ZnCl23.6g，加入IOOmL双口烧瓶中，随后加入2,5_二溴-3,4-二甲基苯甲酸0.308g,I.Ommol和2-轻基苯乙酸0.182g,1.2mmol的混合粉末，微波照射加热，控制温度85°C，反应40min，反应完毕，冷却至室温，将冷却后的产物倒入IOOmL冰水中，搅拌，静置，抽滤，滤饼水洗至弱酸性;滤液用乙酸乙酯EtOAc萃取，旋蒸除去乙酸乙酯后，将残渣与滤饼合并，混合物用EtOAcMeOH重结晶纯化，得淡黄色晶体0.307g，收率85.0%。]\1·p.:152-154°C匪R[CD32S0,400MHz]δ:8·12s，1H，8.06dd，J=8.0，1.6Ηζ,1Η,7.79dd,J=7.2,1.6Ηζ,1Η,7.42dd,J=7.6,1.6Hz,1H,3.98s,2H,2.49s,3H,2.48s,3H,13CNMR[CD32S0,75MHz]δ：175.03-C00H,171.64C-9,153.62C-4a,152.11C-4b,143.32C-6,136.90C-3,128.04C-8,125.62C-4,125.34C-5,124.52C-I,123.94C-2,120.21C-8b,120.04C-8a,119.72C-7,53.30CH2,20.33CH3,12.42CH3.ESI-MSmz:361.0[M+H]+。以上数据证实该化合物为2-7-溴-5,6-二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸。[0049]1.1.3DMXAA的制备[0050]将2-7-溴-5，6-二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸0·361g，1·Ommol溶于无水甲醇，加催化量PdC30mg，通入高纯出（Iatm，TLC监控，待反应完全，关闭H2阀门，撤去导气管。过滤除去PdC，滤液经TLC检查为纯化合物，旋蒸除去溶剂，得淡黄色粉末0.24g，收率85.0%。]«4·:155-157°C匪RDMS0-d6,400MHzδ:12.62s，1H，8·10dd，J=8.0，1·6Ηζ，1Η，Η-1,7.93d，J=8.4Hz，lH，H-8,7.79dd，J=7.2，1.6Hz，lH，H-3,7.42dd，J=7.6,1.6Hz,lH,H-7,7.31d,J=8.OHz,lH,H-2,3.99s,2H,2.44s,3H,2.42s,3H;13CNMRDMS0-d6,75MHzS:176.06-C00H，171.69C-9，153.71C-4a，153.23C-4b,144·62C-6,136.47C-3,125.91C-4,125.22C-5,125.09C-7,124.55C-I，123.56C-2,122.53C-8,120.49C-8b,118.74C-8a,35.39C-9,20.08CH3,10.99CH3;ESI-MSmz:283·2[M+H]+。以上数据证实该化合物为DMXAA。[0051]1.1.43,4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮的制备[0052]将？0：1312!1^、无水211：123.68加入到5011^双口烧瓶中，加入水杨酸（0.1388，I.Ommol和焦性没食子酸0.151g，1.2mmol的混合粉末，微波加热至85°C后，反应40min，反应毕，冷却至室温，将冷却后的产物倒入IOOmL冰水中，搅拌lOmin，静置，抽滤，水洗滤饼至中性，滤液用乙酸乙酯萃取3次，旋蒸除去溶剂后，合并滤饼和残留物，混合物经干燥后用柱色谱（流动相：石油醚-乙酸乙酯）分离，得黄色粉末0.176g，收率77.1%J.p.220〜2210Ci1HNMRDMS0-d6,300MHz5：7.38dd,J=8.1,0.9Hz,lH,H-8,7.29dd,J=8.1,0.9Hz,1Η,Η-6,6.91-6.95m,2H,H-5,7,6.89d,J=8.4Hz,1H,H-1,6.36d,J=8.4Hz,1H,H-2.13CMffiDMS0-d6,75MHzS:202.62C-9，157.41C-4b，153.61C-3，153.24C-4a，133·64C-6,133.54C-4,131.06C-8,127.04C-7,126.18C-8a,120.03C-I，117.66C-5，115.24C-8b,108.41C-2;ESI-MSmz:228.2[M+H]+。以上数据证明产物为3，4-二轻基-9H-氧杂蒽-9-酮。[0053]1·1·5P比喃咕吨酮pyranoxanthone的制备[00M]称取3,4-二轻基-9H-氧杂蒽-9-酮0.228g,I.Ommol溶于20mL氯仿中，随后加入1-溴-3-甲基-2-丁烯0.206g，1.5mmol及蒙脱土Kiq4.5g，20eq，用功率600W微波照射加热，反应40min，反应结束后，滤去蒙脱土，旋蒸除去溶剂，残留物用硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色粉末0·13g，收率38·5%J·p·:176-178°C;1HNMR400MHz，CDCl3δ:8·331H，dd，J=8.0and1·6Ηζ，Η-7，7.70lH，ddd，J=7.7,8.0，1.6Hz，H-9，7.70lH，s，H-5，7·581Η，dd,J=8.0,1.0Hz,H-8,7.35lH,ddd,J=7.3,7.3,1.OHz,H-10,5.74lH,brs,0H,2.932H，t，J=6·7Hz，H-4，I·922H，t，J=6·7Hz，H-3，I·436H，s，2-CH3;13C-匪R75MHz，CDCl3δ:176.72C-6,156.21C-IOa,146.33C-12a,143.24C-Ila,134.30C-9，132.42C-12,126.60C-7,123.62C-8,121.53C-6a,118.22C-10,117.93C-5,117.04C-4a，115.41C-5a,76.54C-2,32.66C-3,27.02C-4，21.7401’）；ESI-MSmz:296.1[M_H]+。以上数据证明产物为卩比喃咕吨酮Pyranoxanthone。[0055]1.1.64-0-3-轻丙基吡喃咕吨酮的制备[0056]称取吡喃咕吨酮0.296g，I.Ommol和NaOH44mg，I.Immol溶于无水DMF，室温搅拌0.5h，逐滴加入溶解于无水DMF中的3-溴代丙醇0.208g，1.5mmol。滴加加完毕，室温搅拌24h。反应完毕，将反应物倒入50mL冰水中，剧烈搅拌20min，抽滤，得白色物质，硅胶柱层析得淡黄色固体〇·318g，收率89·6%J·p·:161-163°C;1HNMR400MHz，CDCl3δ:8·351H,dd,J=8.0andl.6Hz,H-8,7.73lH,ddd,J=7.6,8.0,1.6Hz,H-6,7.71lH,s,H-l,7.60lH,dd,J=8.0and1.0Hz,H-5,7.37lH,ddd,J=7.6,7.6,and1.0Hz,H-4,5.76lH,s,OH,4.212H，t，J=2.6Hz，H-l"，3.572H，t，J=2.6Hz，H-3"，2.954H，m，H-2,，2",1.972H，t，J=2.6Hz，H-r，1.436H，s，H-4,，5，）；13CNMRCDC13，100MHzS:177.19C-9，157.31C-4b,147.32C-3,144.27C-4a,135.37C-4,133.47C-6,127.62C-8,124.65C-7,122.57C-I,119.25C-8a,118.95C-2,118.05C-5,116.44C-8b,75·59C-3，），62.45C-Γ,57.11C-3",32.75C-2，），31.24C-2",26.44C-4，），26.44C-5’），22.62C-1’）；ESI-MSmz:354.15[1-!1]+。以上数据证明产物为4-0-3-羟丙基）吡喃咕吨酮。[0057]1.1.7D-P-3杂合体化合物的制备[0058]将DMXAA0·339g，1·2mmoI、DCC0·248g，1·2mmo1和DMAP15mg，0·12mmo1溶于30mL无水DMF中，室温下逐滴滴加溶有4-0-3-羟丙基）吡喃咕吨酮0.354g，I.Ommol的无水DMF溶液。滴加完毕，搅拌反应24h。反应完毕，反应混合物倒入50mL冰水中，搅拌20min，抽滤，收集白色粉末，冷水洗涤，粗产物经硅胶柱层析分离纯化，得白色粉末0.324g，收率52.4%〇M.p.:205-206°C；1HNMR500MHz,DMSO-deδ：8.01-8.04m,2H,H-8,6,6.85-6.87m，2H，H-l’，8’），6.73-6.75m，2H，H-5,3’），6.30-6.31m，2H，H-7’，7，6.23-6.24m，2H,H-2’，1,4.00-4.03m，2H，-CH2,3.98q，2H，-CH2,3.34-3.36m，2H，-CH2,2.76-2.79m，2H，-CH2,2.62-2.64m，2H，-CH2,1.78-1.81m，6H，2-CH3,1.41-1.44m，6H，2-CH3;13C匪R125MHz，DMS〇-d6δ:181.36C-9，179.0809’），176.54-C00-,166.76C-4a’），164·13C-4b,161.70C-4b’），158.32C-3,156.63C-4a,151.9706’），136.51C-4，135.6306，134.17C-3’），129.89C-4’），128.48C-8，127.48C-5’），126.45C-7’），125.63C-1’），125.45C-7，124.63C-2’），124.19C-1’），123.39C-8’），122.09C-8b’），121.23C-8a，118.20C-2,104.48C-8a’），98.03C-5,93.83C-8b,79.88Cl",68.93-CH2,64.24-CH2,34.07-CH2,33.98-CH2,32.85-CH2,28.32CH3,25·17CH3,18.65CH3,16.43CH3;ESI-MSmz:617.23[M+H]+。以上数据证明产物为DMXAA-Pyranoxanthone-3D-P-3，结构如下所不：[0060]1.2D-P-4供体化合物的制备[0061]包括7个步骤。其中，步骤1.2.1〜1.2.5同1.1.1〜1.1.5。[0062]1.2.64-0-4-轻丁基吡喃咕吨酮的制备[0063]以4-溴代丁醇0.229g,1.5mmol替代3-溴代丙醇0.208g,1.5mmol，其它过程同1.1.6。得淡黄色固体0.307g，收率83.4%。]«.口·：159-161°C^H-NMR400MHz,CDCl3δ:8·31lH，dd，J=8.0and1·6Ηζ，Η-8，7.70lH，ddd，J=7.6,8.0，1.6Hz，H-6，7.63lH，s，H-l，7.52lH,dd,J=8.Oand1.0Hz,H-5,7.311H,ddd,J=7.6,7.6,and1.0Hz,H-4,5.70lH，s，0H,4.152H，t，J=2.6Hz，H-l",3.432H，t，J=2.6Hz，H-4",2.916H，m，H-2,，2"，3",2.022H，t，J=2·6Ηζ，Η-Γ,1.406H，s，H-4’，5’）；13CNMR100MHz,CDCl3δ:178.11C-9,158.38C-4b,148.35C-3,145.48C-4a,136.40C-4,134.39C-6,128.72C-8,125.70C-7,123.87C-I,120.15C-8a,119.44C-2,119.15C-5，117.43C-8b,76.88C-3，），63.49C-l",58.13C-4",33.87C-2，），32.75C-2"，31.64C-3"，27.43C-4’），27.43C-5’），23.65C-1’）.ESI-MSmz:368.16[M-H]+。以上数据证明产物为4-0-4-羟丁基吡喃咕吨酮。[0064]1.2.7D-P-4杂合体化合物的制备[0065]以4-0-4-羟丁基）吡喃咕吨酮0.3688，1.0!11111〇1替代4-0-3-羟丙基）吡喃咕吨酮（0·354g，I·Ommol，其它过程同I·I·7。得白色粉末0·324g，收率51·3%J·p·:209-211cCjHNMRDMS0-d6,500MHzδ:8.13-8.16m，2H，H-8,6,6.96-6.99m，2H，H-l’，8’），6·8卜6.87m，2H，H-5,3’），6.40-6.44m，2H，H-7’，7，6.3h6.36m，2H，H-2’，l，4.13t，2H，-CH2,4.10q,2H,-CH2,3.42-6.49m,2H,-CH2,3.03-3.08m,2H,-CH2,2.81-2.86m,4H,2-CH2,1.90-1.95m,6H,2-CH3,1.51-1.56m,6H,2-CH3；13CNMRDMSO-de,125MHzδ：182.23C-9,179.95C-^,177.41-C00-,167.63C-4a,165.00C-4b,162.57C-4b’），159.19C-3，157.50C-4a，152.84C-6’），137.38C-4，136.50C-6，135.04C-3’），130.76C-4’），129.35C-8，128.35C-5’），127.33C-7’），126.50C-1’），126.32C-7，125.5002’），124.2601’），122.9608’），122.68C-8b’），122.10C-8a,119.08C-2,105.35C-8a’），98.91C-5,94.70C-8b,80.75Cl”），69.80-CH2,65.11-CH2，34·94-CH2，34·85-CH2，33·72-CH2，33·37-CH2，26·23CH3，26·04CH3，16·88CH3,14.69CH3;ESI-MSmz:631.25[M+H]+。以上数据证明该化合物为D-P-4杂合体化合物，其结构如下：[0067]1.3D-P-5杂合体化合物的制备[0068]包括7个步骤。其中，步骤1.3.1〜1.3.5同1.1.1〜1.1.5。[0069]1.3.64-0-5-轻戊基吡喃咕吨酮的制备[0070]以5-溴代戊醇0.25g，1.5mmol替代3-溴代丙醇0.208g，1.5mmol，其它过程同1·1·6。得淡黄色固体0·327g，收率85·6%J·p·:155-157°C;1HNMRCDCl3，400MHzδ:8·37lH，dd，J=8.0and1·6Ηζ，Η-8，7.76lH，ddd，J=7.6,8.0，1.6Hz，H-6，7.69lH，s，H-l，7.57lH,dd,J=8.Oand1.0Hz,H-5,7.381H,ddd,J=7.6,7.6,and1.0Hz,H-4,5.76lH，s，0H,4.192H，t，J=2.6Hz，H-l",3.482H，t，J=2.6Hz，H-5",2.968H，m，H-2,，2"，3"，4",2.072H，t，J=2.6Hz，H-r,1.456H，s，H-4,，5’）；13CNMRCDC13，100MHzδ:178.34C-9,158.57C-4b,148.65C-3,145.59C-4a,136.67C-4,134.58C-6,128.89C-8,125.85C-7,123.92C-I,120.34C-8a,119.68C-2,119.63C-5，117.51C-8b,76.96C-3，），63.67C-l",58.45C-5",33.99C-2，），32.94C-2"，31.86C-3",29.86C-4",27.66C-4，），27.66C-5，），23.59C-Γ;ESI-MSmz:382.18[M-H]+。以上数据证明产物为4-0-5-羟戊基吡喃咕吨酮。[0071]1.3.7D-P-5杂合体化合物的制备[0072]以4-0-5-羟戊基）吡喃咕吨酮0.368g，l.Ommol替代4-0-3-羟丙基）吡喃咕吨酮0.3548，1.0111111〇1，其它过程同1.1.7。得白色粉末0.328，收率49.6%。]\14.:211-2131€!1HNMRDMSO-de,500ΜΗζδ：8.11-8.15m,2H,H-8,6,6.94-6.97m,2H,H-I',8^,6.80-6.86m，2H，H-5,3’），6.4h6.45m，2H，H-7’，7，6.32-6.36m，2H，H-2’，l，4.10t，2H，-CH2,4.07q，2H，-CH2,3.41-3.46m，2H，-CH2,2.95-2.99m，4H，2-CH2,2.87-2.92m，4H，2-CH2，I·90-1·95m，6H，3-CH3，I·50-1·54m，6H，2-CH3;13CNMRDMS〇-d6，125MHzδ:182.95C-9，180.67C-9’），178.14-C00-，168.35C-4a’），165.72C-4b，163.30C-4b’），159.92C-3，158.22C-4a，153.56C-6’），138.10C-4，137.23C-6，135.76C-3’），131.48C-4’），130.08C-8，129.07C-5’），128.05C-7’），127.22C-1’），127.04C-7，126.2302’），125.7901’），124.9908’），123.68C-8b’），122.83C-8a,119.80C-2,106.08C-8a’），99.63C-5,9542C-8b,81.47Cl”），70.52-CH2,65.83-CH2，35·66-CH2，35·57-CH2，34·44-CH2，29·92-CH2，26·95-CH2，26·76CH3，26·76CH3,17.61CH3，15.42CH3;ESI-MSmz:645.26[M+H]+。以上数据证明该化合物为D-P-5,其结构如下：[0074]1.4D-P-6杂合体化合物的制备[0075]包括7个步骤。其中，步骤1.4.1〜1.4.5同1·1·1〜1·1·5。[0076]1.4.64-0-6-轻己基吡喃咕吨酮的制备[0077]以6-溴代己醇0.272g,1.5mmol替代3-溴代丙醇0.208g,1.5mmol，其它过程同1·1·6。得淡黄色固体0·329g，收率83·1%I.p·:153-155°C;1HNMRCDCl3，400MHzδ:8·31lH，dd，J=8.0and1·6Ηζ，Η-8，7.72lH，ddd，J=7.6,8.0，1.6Hz，H-6，7.48lH，s，H-l，7.46lH,dd,J=8.Oand1.0Hz,H-5,7.541H,ddd,J=7.6,7.6,and1.0Hz,H-4,5.56lH，s，0H,4.262H，t，J=2.6Hz,Η-Γ,3.572H，t，J=2.6Hz，H-6",2.9210H，m，H-2’，2"，3"，4"，5",2.112H，t，J=2.6Hz，H-r,1.416H，s，H-4,，5’）.13C-NMRCDC13，100MHz5:179.02C-9,158.90C-4b,149.25C-3,145.93C-4a,137.33C-4,135.08C-6,129.31C-8，126.22C-7，124.38C-1，120.80C-8a，119.95C-2,119.97C-5，117.96C-8b,77.89C-3，），64.32C-l",58.96C-6",34.62C-2，），32.41C-2"，31.49C-3"，29.67C-4"，28.48C-4"，27.53C-4，），27.53C-5，），22.97C-1，）.MS-ESImz:396.19[M-H]+。以上数据证明产物为4-0-6-羟己基吡喃咕吨酮。[0078]1.4.7D-P-6杂合体化合物的制备[0079]以4-0-6-羟己基）吡喃咕吨酮0.396g，l.Ommol替代4-0-3-羟丙基）吡喃咕吨酮（0.354g，l.Ommol，其它过程同1.1.7。得白色粉末0.319g,收率48.3%J.p.:215-2170Ci1HNMRDMS0-d6,500MHz5：8.10-8.14m,2H,H-8,6,6.92-6.96m,2H,H-1，,^,6.80-6.85m，2H，H-5,3’），6.33-6.38m，2H，H-7’，7，6.30-6.35m，2H，H-2’，l，4.10t，2H，-CH2,4.07q，2H，-CH2,3.44-6.46m，4H，2-CH2,2.95-2.99m，4H，2-CH2,2.86-2.92m，4H，2-CH2，I·88-1·92m，6H，2-CH3，I·48-1·53m，6H，2-CH3;13CNMRDMS〇-d6，125MHzδ:183.25C-9，180.98C-9’），178.44-C00-，168.65C-4a’），166.02C-4b，163.60C-4b’），160.22C-3,158.52C-4a,153.86C-6’），138.40C-4,137.53C-6,136.07C-3’），131.79C-4’），130.38C-8，129.38C-5’），128.35C-7’），127.52C-1’），127.35C-7，126.5302’），126.0901’），125.2908’），123.98C-8b’），123.13C-8a,120.10C-2，106·38C-8a’），99·93C-5，95·73C-8b，81·78Cl”），70·82-CH2，66·14-CH2，35·96-CH2，35·88-CH2，34·74-CH2，34·40-CH2，29·33-CH2，26·95-CH2，27·25CH3，26.06CH3,17.91CH3，15.72CH3;MS-ESImz:659.28[M+H]+。以上数据证明该化合物为D-P-6,其结构如下：[0081]实施例2[0082]D-P-3〜D-P-6及DP联合药物的体外肿瘤细胞增殖抑制活性实验[0083]实验方法:取对数生长期的细胞接种于96孔板，接种密度为IXIO4个孔，培养过夜。融合度达70%以上时加药处理，实验设置空白组、对照组和不同浓度给药组。将D-P-n杂合体化合物从200μΜ开始依次进行梯度稀释，每组设3个复孔。孵育24h后，每孔加入IOyL的MTT溶液，放置在37°C，含5%CO2的培养箱中继续，MTT溶液时注意避光。孵育4h后，将每孔内的溶液吸弃，注意不要将结晶体吸走，最后每孔再加IOOyL新鲜DMSO溶液，避光放在摇床上震摇15min后，放在酶标仪上进行读数测定OD值。酶标仪波长设置在570nm，计算细胞存活率，重复3次。[0085]以样品浓度为横轴，以细胞生长抑制率为纵轴绘制曲线。根据细胞生长曲线，计算出半数有效抑制浓度IC5Q值。[0086]表2-1.目标化合物的半抑制常数1：50值「00871[0088]3按摩尔比D:P=1:1混合。[0089]从表2_1实验结果可知，单体药0]\1?^40和。5^311〇13111:11〇116?的体外抑制活性均不高，其中单体药P对MCF-7细胞株的IC5QμΜ值仅为101·5±11·72μΜ;而D对HepG2细胞株的IC50μΜ值仅为100.2±11.24μΜ。但D和P联合用药后，能够提高对所检测细胞株的体外抑制活性；以D和P按1:1摩尔比的联合用药，其对MCF-7和HepG2的IC5q值μΜ分别为11.89土1·227μ]\^Ρ21·25±2·728μΜ。[0090]相比于单体化合物D和P，D-P杂合体化合物对所检测细胞株均具有增强的体外增殖抑制作用。其中尤以D-P-6的活性最佳，其对MCF-7和HepG2的IC5q值μΜ分别为0.534土0·043μΜ和0·216±0·031μΜ。[0091]D-P-n类杂合体化合物对各种肿瘤细胞的增殖抑制能力与二者之间碳链的长度有一定的相关性，在所考察的范围内，碳链越长，其体外抑制肿瘤细胞增殖的活性越好。[0092]实施例3[0093]D-P-6对正常细胞的毒性[0094]实验方法同实施例1。[0095]结果表面，化合物D-P-6对人肝细胞系HL-7702和小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3显示出较低的体外细胞增殖抑制作用。[0096]具体地，化合物D-P-6作用HL-7702细胞24、48h后的IC5Q是452.29±41.20、351.98±31.26以]«;化合物0-?-6作用1«!13丁3细胞24、4811后的1〇5。是378.03±37.22、293.22±25.34μΜ。说明化合物D-P-6对所检测的肿瘤细胞株均有较强的细胞毒性，而对正常细胞的毒性较小。[0097]实施例4待测物对HepG2细胞周期的影响实验[0098]采用流式细胞术检测相同浓度0·2μΜ下化合物DMXAA⑼、PyranoxanthoneP、P+D摩尔比1:1、D-P-6对!fepG2细胞周期的影响。[0099]从图3结果可知：相比于正常组细胞，化合物D、P，P+D、D-P-6对HepG2的S期的细胞比率变化较为明显，在0.2μΜ浓度下处于S期的细胞比例为30.3%,35.8%,39.4%和55.4%，能够将细胞阻滞在S期。与化合物D、P和P+D相比，化合物D-P-6对HepG2的S期的影响最为明显，能够将细胞阻滞在S期。可见化合物D-P-6对细胞周期的影响比化合物D、P，P+D联合用药时对细胞周期的影响更为显著。[0100]实施例5待测物诱导HepG2细胞凋亡[0101]实验方法:将HepG2细胞经过相同浓度0·2μΜ的DMXAAD、PyranoxanthoneP、P+D摩尔比1:1、D-P-6作用之后，用AnnexinV-FITCPI进行染色，然后进行流式分析可以检测细胞的凋亡比率。[0102]流式散点图（图4显示，HepG2细胞经过相同浓度的D、P，P+D、D-P-6作用之后，在AnnexinV-FITC和PI染色区，呈现出明显的早期凋亡和中、晚期凋亡的细胞分群。[0103]0.2以10、？单独作用于此？62细胞时，此？62细胞的凋亡比率较小，仅为6.3%、20.4%;0.2μΜ的P+D联合用药作用于HepG2细胞24h后的凋亡率为61.2%;而D-P-6作用HepG2细胞24h后细胞凋亡比率为82.5%。相比于D、P、P+D对细胞凋亡的影响结果，相同浓度的D-P-6可显著升高细胞凋亡率。[0104]实施例6待测物诱发HepG2线粒体膜电位下降实验[0105]实验方法:HepG2细胞经过浓度为0·2μΜ的DMXAA⑼、Pyranoxanthone⑵、P+D摩尔比1:1、D-P-6分别处理24h后，用JC-I进行染色，然后进行流式细胞分析，由此检测细胞的线粒体膜电位的变化。[0106]从流式散点图（图5的实验结果显示，HepG2细胞经过相同浓度0.2μΜ的D、P、P+D、D-P-6分别处理后之后，细胞的线粒体膜电位下降的细胞所占比例具有明显的变化。其中，0.2μΜ单体化合物D、P分别单独作用于HepG2细胞24h后，线粒体膜电位下降的细胞所占比例为11.6%、11.0%;0.2μΜP+D联合用药作用于HepG2细胞24h后，线粒体膜电位下降的细胞所占比例为94.6%;而杂合体化合物D-P-6作用于HepG2细胞24h后，线粒体膜电位下降的细胞所占比例为97.1%。可见，联合用药D+P和杂合体化合物D-P-6均能显著降低线粒体膜电位，尤以D-P-6表现更为显著。该结果揭示，化合物D-P-6可以通过线粒体途径诱导细胞凋亡。[0107]实施例7待测物对凋亡相关蛋白表达水平影响实验[0108]实验方法:将对数生长期细胞，接种于IOOmm培养皿中，培养过夜。待细胞生长融合度达70%以上，按实验设定加药。分别加浓度为0·2μΜ的DMXAA⑼、PyranoxanthoneP、P+D摩尔比1:1、D-P-6处理48h后，细胞用不含EDTA的胰蛋白酶消化液消化细胞，待细胞在显微镜下变圆，用移液器吹打下细胞，收集细胞，离心2000Xg，5min。离心后，弃上清，保留细胞沉淀。加入细胞裂解液RIPA预先加好蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），提取细胞全蛋白溶液。采用BCA试剂盒来检测蛋白浓度。然后进行Westernblot免疫印迹实验。[0109]实验结果揭示，化合物P以及联合用药P+D处理HepG2细胞后，Caspase9和Caspase3的蛋白含量相比于空白组出现较明显的减少，而其剪切活化形式的CIeaved-caspase3和Cleaved-caspase9则具有增加的趋势。用D-P-6处理HepG2细胞后，Caspase9和Caspase3的蛋白含量比相同浓度下的P和P+D联合用药组明显减少（图6A;D-P-6显著增加P53的表达水平，同时降低MDM2的表达，使p53MDM2达到一种更健康的平衡，这种作用比P和P+D联合用药组对P53MDM2的影响更加明显（图6B;实验结果还揭示，相同浓度的P，P+D，D-P-6作用于细胞后对Bcl-xL及Bcl-2、Bid的影响明显不同。同等浓度下，化合物D-P-6对Bcl-2及Bcl-xL的表达含量影响最大，同时可以较明显的提高Bid的表达含量（图6C;实验结果更进一步揭示，化合物P、P+D联合用药处理HepG2细胞后，p38ERKJNK的蛋白表达相比于空白组出现较明显的减少，而其磷酸化活化蛋白P-P38，p-ERKl2，p-JNK的表达水平则有增加的趋势。D-P-6处理!fepG2细胞后，p38的蛋白表达比相同浓度下的P、P+D联合用药明显减少（图6D。[0110]Westernblot的数据证明化合物D+P联合药物和D-P-6可以通过多个革El标诱导!fepG2细胞的凋亡。[0111]最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

权利要求：1·一种具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物，其特征在于，结构如式I所示：式I中，X=0，N;n=2,3,4,5,6,7,8;Y=0，N。2·如权利要求1所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物，其特征在于:式I中，X=0;n=3,4,5,6;Y=0。3.—种如权利要求1或2所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物的制备方法，其特征在于，包含以下七个步骤：51.将3，4-二甲基苯甲酸溶于浓硫酸，分批加入N-溴代琥珀酰亚胺反应8〜14h，后处理得2，5-二溴-3，4-二甲基苯甲酸；52.将无水氯化锌溶于三氯氧磷，然后加入2，5-二溴-3，4-二甲基苯甲酸与邻羟基苯乙酸，反应温度60〜90°C，加热搅拌30〜60min，反应结束后分离纯化得2-7-溴-5，6-二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸；53.将化合物2-7-溴-5，6-二甲基-9-氧-9H-氧杂蒽-4-基）乙酸溶于适量溶剂，经H2PdC还原，分离纯化得5，6-二甲基咕吨酮-2-乙酸；54.将无水氯化锌溶于三氯氧磷，然后加入水杨酸及联苯三酚，反应温度50〜95°C，加热搅拌30〜60min，反应结束后分离纯化得3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮；55.将3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮与1-溴-3-甲基-2-丁烯及蒙脱土KlO在微波加热条件下反应，反应结束后分离纯化得吡喃咕吨酮；56.将吡喃咕吨酮溶于碱中，滴加溶于有机溶剂中的η-溴取代醇反应，在10〜40°C反应20〜30h，结束后分离纯化得4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮；S7.将4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮及DMXAA溶于适量有机溶剂，加入缩合剂和催化剂，反应温度10〜40°C，反应时间15〜30h，分离纯化后得DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物。4.如权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物的制备方法，其特征在于：Sl中3,4_二甲基苯甲酸与N-溴代琥珀酰亚胺的投料比为1.0:1.0〜5.0;S2中2，5-二溴-3，4-二甲基苯甲酸与邻羟基苯乙酸的投料比为1.0:1.0〜5.0;三氯氧磷与无水氯化锌的投料重量比为5.0〜10.0:1.0;S3中的溶剂为甲醇、乙醇和二氯甲烷中的一种;所用氢气压力为1.0〜1.5atm;S4中水杨酸与间苯三酚的投料摩尔比为1.0:1.0〜3.0;三氯氧磷与无水氯化锌的投料重量比为5.0〜10.0:1.0;加热方式为微波加热或者油浴加热；S5中3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮与1-溴-3-甲基-2-丁烯的投料比为1.0:1.0〜3.0;3，4-二羟基-9H-氧杂蒽-9-酮与蒙脱土KlO的投料比为1.0:1.0〜3.0;S6中吡喃咕吨酮与η-溴取代醇的投料比为1.0:1.0〜3.0;所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的任何一种;所用有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种；S7中4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮、DMXAA和缩合剂的投料摩尔比为1.0:1.0〜3.0:1.0〜3.0;所用缩合剂为Ν,N-二环己基碳二亚胺、Ν,N-二异丙基基碳二亚胺和1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐中的任何一种，所用催化剂为4-二甲氨基吡啶。5.如权利要求2所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物的制备方法，其特征在于：S3中的溶剂为甲醇；S4中加热方式为微波加热；S6中所用有机溶剂为Ν，Ν-二甲基甲酰胺;催化剂4-二甲氨基吡啶的加入量为4-0-η-羟烷基吡喃咕吨酮摩尔投料量的5〜10%。6.权利要求1或2所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物在制备多靶点癌症治疗药物中的应用。7.权利要求1或2所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物在制备治疗肝癌药物中的应用。8.权利要求1或2所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。9.权利要求1或2所述的具有抗肿瘤作用的DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物在制备治疗白血病药物中的应用。

百度查询： 广州药本君安医药科技股份有限公司 一种DMXAA-Pyranoxanthone杂合体化合物及其制备方法与用途