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申请/专利权人：山西大学;长治医学院
摘要：本发明公开了利用CRISPRCas9技术构建斑马鱼asap1a基因敲除突变体的方法。具体包括以下步骤：确定asap1a基因敲除的靶点位置即asap1a‑gRNA靶位点，体外转录获得asap1a‑gRNA，将asap1a‑gRNA与Cas9mRNA导入斑马鱼受精卵中，筛选培养获得稳定遗传的asap1a基因敲除突变体。本发明根据选择的asap1a基因的一段独特的高效率打靶区，利用CRISPRCas9技术使得斑马鱼中的asap1a基因被敲除并产生可遗传的asap1a基因敲除的斑马鱼，且本发明共获得了3种突变类型的asap1a基因敲除突变体斑马鱼品系，对研究asap1a基因的功能奠定动物模型基础。
主权项：1.利用CRISPRCas9技术构建斑马鱼asap1a基因敲除突变体的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1.在斑马鱼asap1a基因上选择asap1a-gRNA靶位点，分析确认asap1a-gRNA靶位点敲除特异性；S2.制备asap1a-gRNA；S3.将asap1a-gRNA和Cas9mRNA导入斑马鱼中制备F0代斑马鱼，并鉴定asap1a-gRNA靶位点打靶效率；S4.鉴定F0代斑马鱼子代即F1代斑马鱼卵中asap1a基因类型，进而筛选出亲本F0代斑马鱼中可以遗传的asap1a敲除突变体；S5.筛选F2代斑马鱼中asap1a基因敲除纯合突变体，培养获得稳定遗传的斑马鱼asap1a基因敲除突变体，即完成利用CRISPRCas9技术对斑马鱼asap1a基因敲除突变体的构建。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山西大学 长治医学院 利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asap1a基因敲除突变体的方法
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