恭喜上海近岸科技有限公司;苏州近岸蛋白质科技股份有限公司李科获国家专利权
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龙图腾网恭喜上海近岸科技有限公司;苏州近岸蛋白质科技股份有限公司申请的专利甲醛重交联在CUT&Tag技术建库中的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117051078B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-01-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310592949.4,技术领域涉及:C12Q1/6806;该发明授权甲醛重交联在CUT&Tag技术建库中的应用是由李科;时英东;丁帅;周雁红设计研发完成,并于2023-05-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本甲醛重交联在CUT&Tag技术建库中的应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种甲醛重交联在CUTTag技术建库中的应用。本发明的方法的细胞需求量较低、测序信噪比高、操作相对简单,同时兼顾ChIP实验的甲醛重交联固定细胞的优势。特别地,ChiTag方法在探究蛋白质‑DNA弱相互作用中,具有显著优势。
本发明授权甲醛重交联在CUT&Tag技术建库中的应用在权利要求书中公布了:1.一种构建核酸文库的方法,其特征在于,包括:S1提供一细胞样本;S2通过终浓度C1的交联剂溶液,固定化处理上述细胞样本t1时间,其中固定化处理积分I1=C1*t1,I1为2.5%~300%,获得一未通透化的细胞样本;S3对所述未通透化的细胞样本进行通透化处理,获得经通透化处理的细胞样本;S4洗涤上述经通透化处理的细胞样本,获得经洗涤的细胞混合物;S5将上述细胞混合物与已经预处理的磁珠混合,获得细胞-磁珠复合物;S6利用一抗处理上述的细胞-磁珠结合物,获得一抗-细胞-磁珠复合物;S7利用二抗处理上述一抗-细胞-磁珠复合物,获得二抗-一抗-细胞-磁珠复合物;S8利用转座酶处理上述二抗-一抗-细胞-磁珠复合物,进行片段化反应,形成DNA片段;S9终止反应并解交联,获得反应终止产物;和S10分离、纯化、扩增上述反应终止产物中的DNA片段,制备核酸文库;S2中,所述交联剂选自下组:甲醛、EGS、DSG;t1为5~60min;C1为0.5%~5%vv;I1为2.5%~300%;S2中,所述固定化处理包括:S2.1按照3×103~3×106个mL的细胞密度向S1中的细胞样本加入相应体积的0.5%~5%甲醛交联剂溶液,室温孵育5~60min;S2.2通过终浓度125~1000mM甘氨酸终止反应,终止时间5~15min;S3中,所述通透化处理包括:通过包含C2通透剂的通透缓冲液,通透化处理上述经固定化处理的细胞样本t2时间,获得经通透化处理的细胞样本;C2为0.005%~5%vv;t2为5~60min;所述通透缓冲液的pH值为7.0~7.8;所述通透缓冲液选自下组:PB、Tris、HEPES缓冲液;所述通透剂选自下组中的一种或多种:Tween20、SDS、NP40、Digtonin、CHAPS、脱氧胆酸钠;S4中,用于细胞洗涤的细胞洗涤缓冲液为含0.01%~0.1%vv通透剂的缓冲液。
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