买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

龙图腾网恭喜华南农业大学申请的专利猪骨桥蛋白IC-ELISA检测的建立方法、试剂盒及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115166257B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-01-07发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210716771.5，技术领域涉及：G01N33/68；该发明授权猪骨桥蛋白IC-ELISA检测的建立方法、试剂盒及应用是由张守全;黄建豪;曾繁文;卫恒习;李莉设计研发完成，并于2022-06-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本猪骨桥蛋白IC-ELISA检测的建立方法、试剂盒及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了猪骨桥蛋白IC‑ELISA检测的建立方法、试剂盒及应用，属于免疫学技术领域。通过本发明提供的骨桥蛋白酶联免疫检测试剂盒和方法，可实现对精液中骨桥蛋白的含量进行检测；特异性好，灵敏度高，检测结果准确性好，重复性好；样品处理简单，检测操作简单，试剂盒均已工作液的形式提供，可对猪场中大规模种公猪群体进行筛选。

本发明授权猪骨桥蛋白IC-ELISA检测的建立方法、试剂盒及应用在权利要求书中公布了：1.一种猪骨桥蛋白IC-ELISA检测的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：骨桥蛋白的制备：以PET-32a+质粒为基础，从酶切位点Ndel和EcoRI插入序列如SEQIDNO.1所示的OPN基因序列，得到重组质粒OPN-Pet-32a；将重组质粒OPN-Pet-32a转化至大肠杆菌BL21DE3中，培养至OD值为0.4-0.6时，加入0.1MIPTG进行诱导表达，菌体破碎后收集上清；采用镍柱纯化目的蛋白，洗脱液中氯化钠浓度为300mM，即获得所述的骨桥蛋白；S2：骨桥蛋白单克隆抗体的制备：采用保藏编号为CCTCCNO：C2009293的杂交细胞瘤细胞株Cy2制备抗体；S3：酶联免疫检测方法的建立及评估：通过棋盘滴定法，横向梯度包被不同浓度抗原，纵向梯度加入不同浓度的抗体，选择OD值在1.0～1.5之间的包被浓度和抗体稀释倍数进行下一步，根据不同组合的Amax、IC50、AmaxIC50确定最佳包被浓度；在上述最佳包被浓度条件下，设定不同包被时间，根据不同时间的AmaxIC50和IC50确定最佳的包被时间；在上述最佳包被时间条件下，选择不同的封闭时间，比对不同封闭时间的AmaxIC50和IC50确定最佳封闭时间；在上述最佳封闭时间条件下，选择不同稀释倍数的一抗进行孵育和选择不同孵育时间，比对不同稀释倍数的一抗和不同孵育时间的AmaxIC50和IC50确定最佳一抗稀释倍数及一抗孵育时间；在上述最佳一抗稀释倍数及一抗孵育时间条件下，选择不同稀释倍数的二抗进行孵育和选择不同孵育时间，比对不同稀释倍数的二抗和不同孵育时间的AmaxIC50和IC50确定最佳二抗稀释倍数及二抗孵育时间；在上述最佳二抗稀释倍数及二抗孵育时间条件下，选择不同显色时间，比对不同显色时间的AmaxIC50和IC50确定最佳显色时间；在上述最佳显色时间条件下，采用不同浓度梯度的标准蛋白质溶液绘制标准曲线，根据实验结果剔除数据至出现线性关系，实验结果满足R2＞0.99和CV%＜15%的纳入线性范围。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人华南农业大学，其通讯地址为：510642 广东省广州市天河区五山路483号；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。